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 质粒小量抽提试剂盒

  产品编号D0003
  产品包装: 200次
  产品价格: 398.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D0003 质粒小量抽提试剂盒 200次 398.00元

      碧云天的质粒小量抽提试剂盒(Plasmid Mini Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒的快速抽提的试剂盒。
      本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足30分钟即可完成。
      每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。每个纯化柱可用于抽提1-5毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。
      由本试剂盒抽提所得的质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。由本试剂盒抽提所得的质粒可以转细胞,但效果一般,可以用作质粒在细胞内表达的初步检测。为取得最佳的质粒转细胞效果,建议使用碧云天生产的(D0018)质粒中量抽提试剂盒(D0026)质粒大量抽提试剂盒
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D0003-1 溶液I (悬浮液) 55ml
D0003-2 溶液II (裂解液) 55ml
D0003-3 溶液III (结合液) 80ml
D0003-4 溶液IV (洗涤液) 36ml×2(第一次使用前每瓶加入54ml无水乙醇)
D0003-5 溶液V (洗脱液) 12ml
D0003-6 RNase A (100mg/ml) 55微升
D0003-7 小抽质粒纯化柱及废液收集管 200套
说明书 1份

保存条件:
      室温保存,一年有效。
注意事项: 
      第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I(悬浮液)中,混匀,并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
      第一次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入54ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
      温度较低时,溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,37℃水浴加热溶解,混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀,否则会产生大量气泡。
      溶液II使用完后,一定要盖紧瓶盖,防止被空气中二氧化碳酸化。
      溶液II有强碱性,溶液II和溶液III对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
      废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.取过夜菌1.5毫升,5000g离心1分钟收集细菌沉淀,弃上清。再重复一次,每管共收集3毫升过夜菌沉淀。
通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟,如沉淀不充分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密,不利于加入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清,再倒入约1.5毫升菌液并重复上述操作,然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸),使液体流尽。如果细菌密度明显偏低,可考虑使用更多菌液,再重复上述操作1-2次。对于高拷贝质粒所用菌量一般不能超过5毫升,对于低拷贝质粒所用菌量一般不能超过10毫升。过量的细菌会导致后续的裂解不充分。
2.每管加入250微升溶液I,重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开,无可见细菌团块。
确认溶液I中已经添加了RNase A。最高速度vortex 5-10秒或更长时间,悬起沉淀。一定要充分混匀,对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液,无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex,可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开或用手指把沉淀弹开。
3.每管加入250微升溶液II,轻轻颠倒离心管4-6次,使细菌完全裂解,溶液透明。
切勿vortex!vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂,易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4-6次后,溶液应变得透明,无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开,那么颠倒4-6次后,可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况,可以增加颠倒次数3-5次,再室温放置2-3分钟,但总裂解时间不可超过5分钟。
4.每管加入350微升溶液III,随即颠倒离心管4-6次混匀,可见白色絮状物产生。
切勿vortex!颠倒次数也不宜过多,否则易导致最终所得质粒的质量下降。
5.最高速(13,000rpm左右)室温离心10分钟。
离心后会产生白色沉淀。离心时准备好下一步需使用的质粒纯化柱,废液收集管,并在纯化柱上做好标记。
6.将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心30-60秒,倒弃收集管内液体。
质粒倒入质粒纯化柱后,可以不用等待,直接离心。倒弃收集管内的液体后,保留收集管继续使用。
7.在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV,最高速离心30-60秒,洗去杂质,倒弃收集管内液体。
加入溶液IV后可以不用等待,直接离心。倒弃收集管内的液体后,保留收集管继续使用。
8.再最高速离心1分钟,除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
注意:倒弃收集管内液体后再离心,才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
9.将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入50微升溶液V至管内柱面上,放置1分钟。
溶液V需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液V沾在管壁上,一定要震动离心管,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或 Milli-Q级纯水替代溶液V,但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长,对于增加质粒产量会略有帮助。
10.最高速离心1分钟,所得液体即为高纯度质粒。
通常所得质粒浓度为0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高浓度的质粒,可以采用常规的乙醇沉淀方法浓缩质粒。

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使用本产品的文献:
1. Jin-Feng Sun, Min Xu, Feng Zhang and Zheng-Xiang Wang.
Novel recombinant Escherichia coli Producing ethanol from glucose and xylose.
Acta Microbiol Sinica. 2004; 44(5): 600-604.
2. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang,Zhong-Xiang Liu.
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
World Chin J Digestol. 2005 Apr 15;13(8):958-962.
3. Wu Y, Wang XJ, Liu XM, Zeng CY, Liang XQ.
Recombinant PIG11 Gene Retroviral Vector Construction and Its High Expression in HepG2 Cells.
Journal of Nanhua University(Medical Edition). 2007 Sep;35(5):653-9.
4. Wang F, Huang K, Yang L, Gong J, Tao Q, Li H, Zhao Y, Zeng S, Wu X, Stöckigt J, Li X, Qu J.
Preparation of C-23 esterified silybin derivatives and evaluation of their lipid peroxidation inhibitory and DNA protective properties.
Bioorg Med Chem. 2009 Sep 1;17(17):6380-9.
5. Jing RR, Cui M, Sun BL, Yu J, Wang HM.
Tissue-specific expression profiling of receptor for advanced glycation end products and itssoluble forms in esophageal and lung cancer.
Genet Test Mol Biomarkers. 2010 Jun;14(3):355-61.
6. Yongjin J. Zhou, Fan Yang, Sufang Zhang, Haidong Tan and Zongbao K. Zhao.
Efficient gene disruption in Saccharomyces cerevisiae using marker cassettes with long homologous arms prepared by the restriction-free cloning strategy.
World Journal of Microbiology and Biotechnology. 2011 Dec; 27(12):2999-3003.
7. Zhou Y, Wang L, Yang F, Lin X, Zhang S, Zhao ZK.
Determining the extremes of the cellular NAD(H) level by using an Escherichia coliNAD(+)-auxotrophic mutant.
Appl Environ Microbiol. 2011 Sep;77(17):6133-40.
8. Liang QL, Wang BR, Li ZY, Chen GQ, Zhou Y.
Basic research Construction of eukaryotic expression vector of TSLC1 gene.
Arch Med Sci. 2011 Aug;7(4):579-85.
9. Yang F, Zhang S, Zhou YJ, Zhu Z, Lin X, Zhao ZK.
Characterization of the mitochondrial NAD+ -dependent isocitrate dehydrogenase of theoleaginous yeast Rhodosporidium toruloides.
Appl Microbiol Biotechnol. 2012 May;94(4):1095-105.
10. Liang QL, Wang BR, Li ZY, Chen GQ, Zhou Y.
Effect of TSLC1 gene on growth and apoptosis in human esophageal carcinoma Eca109 cells.
Arch Med Sci. 2012 Dec 20;8(6):987-92.
11. Yang W, Zhou Y, Ke Z.
Production of dihydroxyacetone from glycerol by engineered Escherichia coli cells co-expressing gldA and nox genes.
Afr. J. Biotechnol. 2013 Jul;12(27): 4387-4392.
12. Wang X, Jiang Q, Wang W, Su L, Han Y, Wang C.
Molecular mechanism of polypeptides from Chlamys farreri (PCF)'s anti-apoptotic effect in UVA-exposed HaCaT cells involves HSF1/HSP70, JNK, XO, iNOS and NO/ROS.
J Photochem Photobiol B. 2014 Jan 5;130:47-56.
13.Tian W, Yin X, Wang L, Wang J, Zhu W, Cao J, Yang H.
The key role of miR-21-regulated SOD2 in the medium-mediated bystander responses in human fibroblasts induced by α-irradiated keratinocytes.
Mutat Res. 2015 Oct;780:77-85.
14.Xie Y, Wu B, Zhang XX, Yin J, Mao L, Hu M.
Influences of graphene on microbial community and antibiotic resistance genes in mouse gut as determinedby high-throughput sequencing.
Chemosphere. 2016 Feb;144:1306-12.
15.Lu B, Chen L, Zhang Y, Shi Y, Zhou N.
Quantitative analysis of G-protein-coupled receptor internalization using DnaE intein-based assay.
Methods Cell Biol. 2016;132:293-318.
16.Zhang B, Wang Y, Tan Z, Li Z, Jiao Z, Huang Q.
Screening of Probiotic Activities of Lactobacilli Strains Isolated from Traditional Tibetan Qula, A Raw YakMilk Cheese.
Asian-Australas J Anim Sci. 2016 Oct;29(10):1490-9.