非标记定量(Label-free)蛋白质组学

非标记定量(label-free)蛋白质组学技术是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，该技术不需要使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。

碧云天Label-free技术原理

非标记定量(label-free)蛋白质组学按其原理主要分为两种方法：1) Spectrum counts类的非标记定量方法：发展比较早，已经形成多种定量算法，但主要原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础，各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。 2) 以MS1为基础，计算每个肽段的信号强度在LC-MS色谱上的积分，Maxquant是现代高灵敏度质谱(High resolution of modern spectrometers)结果的分析软件，已经渐渐成为蛋白质组学领域内的标准解决方案之一。
碧云天非标记定量(label-free)蛋白质组学技术的定量原理：以一级质谱(MS1，肽段水平)为基础，将质谱数据转化成以色谱保留时间(Retention time)和质荷比(m/z)为变量的二维图谱，在该二维图谱基础加上MS1肽段的强度(Intensity)变量，即将最原始的质谱数据转换成形象的三维图谱，利用Maxquant解析这些肽段的定量信息，从而获得对应蛋白质的相对定量比值。

碧云天Label-free技术服务项目表
服务编号 服务名称 服务时间(工作日) 全额预付特价(元)/样本 半额预付特价(元)/样本 零首付价(元)/样本 服务内容 交付结果
T2305 Label-free 45-50 3400 3600 4000 2-6样
  1. 蛋白质检报告；
  2. 实验报告；
  3. 生物信息学分析结果；
  4. 质谱检测原始数据
T2306 2975 3150 3500 ＞6样
T2309 组织提取定量 ≤10 390 420 460
T2310 血液样本前处理 1300 1400 1550
碧云天Label-free技术服务询价与订购
  1. 请您下载并填写《碧云天蛋白质组学服务询价单》，发送至service@beyotime.com，我们将为您设计最佳方案。
  2. 若有订购意向，碧云天的技术服务人员会与您联系，并签订《碧云天蛋白质组学技术服务协议书》。
  3. 送样时，请下载并填写《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》，发送至service@beyotime.com或碧云天蛋白质组学技术服务人员邮箱。样品的具体要求参见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》。

碧云天Label-free技术特点
  1. 成本低：无需昂贵的同位素标签，蛋白质无需标记，样本所需蛋白总量少，实验耗费低；
  2. 周期短：无需复杂的标记步骤，操作简单，耗时短；
  3. 适用范围广：不受样品条件限制，几乎可对任何物种的各类蛋白质进行鉴定；
  4. 要求高：对液相色谱分离及串联质谱鉴定的稳定性和重复性要求较高，需要有足够的技术重复以确证结果的可靠性。
碧云天Label-free技术服务客户须知
  1. 建议送原始样本，除非客户已经熟练掌握蛋白质组学的蛋白提取方法。
  2. 动物组织样品：湿重不少于200 mg，样品不能溶血，PBS灌注冲洗组织直至去除血液。软骨或骨头等样本，建议不低于400 mg。
  3. 植物组织样品：湿重不少于2 g，取材后用PBS冲洗至少3遍直至去除杂质。
  4. 菌体样品：原则上只接受常见无毒菌的菌体样品，菌体沉淀不少于100 mg或者体积不少于100 μL；若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液，按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。
  5. 细胞样品：收集细胞沉淀，PBS冲洗3遍(以防残留血清中的白蛋白影响鉴定结果)，送样量为1×107或细胞沉淀不少于50 μl。
  6. 培养基上清液：需保证无菌体或细胞(用0.2 μm膜过滤)，条件允许可浓缩后再寄送；送样体积不少于10 ml。
  7. 血清样品：新鲜血液取出后，4℃，2000 g，离心15 min，取上清，即得血清；血清制备过程中保证不能溶血；血清体积要求不少于500 μl；制备血清过程中，客户可根据自己样品和实验要求选择是否添加抗凝剂，一般不用添加。
  8. 若客户直接提供蛋白样品，则蛋白量不少于1 mg，浓度不低于2 mg/mL。
  9. 样品的具体要求及寄送条件详见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》及《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》。
碧云天Label-free技术服务流程

碧云天Label-free技术服务承诺
碧云天承诺提供：
完整的蛋白质组学实验报告(包括具体实验流程)；
生物信息学分析结果；
蛋白质谱检测原始数据；
蛋白质检报告。

Label free分析软件：Maxquant

Label-free定量：包括定量信息统计、蛋白质定量结果及肽段定量统计；

碧云天Label-free技术服务应用方向

疾病标志物筛选、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选、发病机理和调控机制研究、作用机制研究、植物抗逆研究

应用案例
Label-free 半定量蛋白组学分析

De Francesco EM, et al., Vitamin C and Doxycycline: A synthetic lethal combination therapy targeting metabolic flexibility in cancer stem cells (CSCs), Oncotarget, 2017, Vol. 8, (No. 40), pp: 67269-67286.
应用技术：Label-free
IF：4.73