同位素标记磷酸化蛋白质组学(Phosphoproteomics)

Isotope labeled quantitative phosphoproteomics

磷酸化修饰是生物体内蛋白质翻译修饰中功能尤为重要、作用最广泛的修饰方式，它参与调节信号传导、细胞周期、生长发育、新陈代谢以及增殖分化等诸多生命活动过程，因此蛋白质磷酸化研究一直是生物学研究的重点和热点。
碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学(Phosphoproteomics)技术通过巧妙地将iTRAQ技术与TiO2磷酸化肽段富集技术结合从而实现对磷酸化肽段(蛋白质)进行定性和定量的研究。

碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术原理

通过蛋白质提取(Protein Extraction)获得组织细胞中的全蛋白，将全蛋白酶解(Trypsin Digestion)成肽段，iTRAQ试剂对所获得的全部肽段进行标记，标记混合之后的肽段经过TiO2富集得到磷酸化肽段。

碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务项目表
服务编号 服务名称 服务时间
(工作日)		 全额预付特价(元)/样本 半额预付特价(元)/样本 零首付价
(元)/样本		 服务内容 交付结果
T2308 磷酸化蛋白质组学 45-50 10200 10800 12000 iTRAQ标记肽段，TiO2富集磷酸化肽段
  1. 蛋白质检报告；
  2. 实验报告；
  3. 生物信息学分析结果；
  4. 质谱检测原始数据
T2309 组织提取定量 ≤10 390 420 460
T2310 血液样本前处理 1300 1400 1550
碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务询价与订购
  1. 请您下载并填写《碧云天蛋白质组学服务询价单》，发送至service@beyotime.com，我们将为您设计最佳方案。
  2. 若有订购意向，碧云天的技术服务人员会与您联系，并签订《碧云天蛋白质组学技术服务协议书》。
  3. 送样时，请下载并填写《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》，发送至service@beyotime.com或碧云天蛋白质组学技术服务人员邮箱。样品的具体要求参见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》。

碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术特点
  1. 在磷酸化富集前进行iTRAQ标记，避免TiO2富集的不平行对定量结果造成干扰，提高磷酸化蛋白质组学定量分析的准确性；
  2. TiO2 富集方法富集效率高，操作快速，无需特殊设备，能与多种缓冲盐体系兼容；
  3. 采用高分辨率、高扫描速度的质谱，对富集的磷酸化肽段进行大规模分析鉴定；
  4. 结合iTRAQ标记定量技术可对不同样品间的磷酸化水平的差异进行定量比较。
碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务客户须知
  1. 建议送原始样本，除非客户已经熟练掌握蛋白质组学的蛋白提取方法。
  2. 动物组织样品：湿重不少于200 mg，样品不能溶血，PBS灌注冲洗组织直至去除血液。软骨或骨头等样本，建议不低于400mg。
  3. 植物组织样品：湿重不少于2 g，取材后用PBS冲洗至少3遍直至去除杂质。
  4. 菌体样品：原则上只接受常见无毒菌的菌体样品，菌体沉淀不少于100 mg或者体积不少于100 μL；若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液，按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。
  5. 细胞样品：收集细胞沉淀，PBS冲洗3遍(以防残留血清中的白蛋白影响鉴定结果)，送样量为1×107或细胞沉淀不少于50 μl。
  6. 培养基上清液：需保证无菌体或细胞(用0.2 μm膜过滤)，条件允许可浓缩后再寄送；送样体积不少于10 ml。
  7. 血清样品：新鲜血液取出后，4℃，2000 g，离心15 min，取上清，即得血清；血清制备过程中保证不能溶血；血清体积要求不少于500 μl；制备血清过程中，客户可根据自己样品和实验要求选择是否添加抗凝剂，一般不用添加。
  8. 若客户直接提供蛋白样品，则蛋白量不少于1 mg，浓度不低于2 mg/mL。
  9. 样品的具体要求及寄送条件详见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》及《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》。
碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务流程

碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务承诺
碧云天承诺提供：
完整的蛋白质组学实验报告(包括具体实验流程)；
生物信息学分析结果；
蛋白质谱检测原始数据；
蛋白质检报告。

碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学技术服务应用方向

信号转导机制研究、疾病(癌症，代谢性疾病，神经性疾病等)机理研究、蛋白质修饰功能研究、蛋白质分子调控机制研究

应用案例

Qingke Duan, et al., Mechanistic Evaluation and Translational Signature of Gemcitabine-induced Chemoresistance by Quantitative Phosphoproteomics Analysis with iTRAQ Labeling Mass Spectrometry, Sci. Rep.7, 12891; DOI:10.1038/s41598-017-13330-2 ( 2017).
应用技术：TiO2磷酸化肽段富集技术、iTRAQ
IF：4.63