同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学

iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation，iTRAQ)是由AB SCIEX公司研发的一种多肽体外标记技术，该技术采用4种( iTRAQ® reagents-4plex)或8种( iTRAQ® reagents-8plex )同位素标签，通过标记肽段(Peptide)特异氨基酸位点，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样本中蛋白质的相对和绝对含量。

碧云天iTRAQ技术原理

iTRAQ试剂结构由报告基团(Report group)、平衡基团(Balance group)和肽反应基团(Amine-specific reactive group)三部分组成，形成4种或8种相对分子质量均等量(145或305)的异位标签，用于标记酶解后的肽段。在质谱中，任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。以4标试剂为例：报告基团相对分子质量分别为114、115、116和117；平衡基团相对分子质量分别为31、30、29和28，肽反应基团将iTRAQ试剂与肽段上赖氨酸(Lysine，K)及N端氨基酸残基相连，4种报告基团通过平衡基团与肽反应基团相连，形成4种相对分子质量均为145的等量异位标签。

iTRAQ试剂结构

在串联质谱中，报告基团、平衡基团和多反应基团之间的键断裂，平衡基团丢失，带不同同位素标签的同一多肽产生不同的报告离子，根据报告离子的信号强度可获得样品间相同肽段的定量信息，通过软件处理得到蛋白质的相对和绝对定量信息。

iTRAQ标记定量原理

碧云天iTRAQ技术服务项目表
服务编号 服务名称 服务时间(工作日) 全额预付特价(元)/样本 半额预付特价(元)/样本 零首付价(元)/样本 服务内容 交付结果
T2301 iTRAQ 45-50 6000 6300 7000 2标 1. 蛋白质检报告；
2. 实验报告；
3. 生物信息学分析结果；
4. 质谱检测原始数据
T2302 5350 5650 6250 4标
T2303 4888 5250 5800 6标
T2304 4500 4800 5300 8标
T2309 组织提取定量 ≤10 390 420 460
T2310 血液样本前处理 1300 1400 1550
碧云天iTRAQ技术服务询价与订购
  1. 请您下载并填写《碧云天蛋白质组学服务询价单》，发送至service@beyotime.com，我们将为您设计最佳方案。
  2. 若有订购意向，碧云天的技术服务人员会与您联系，并签订《碧云天蛋白质组学技术服务协议书》。
  3. 送样时，请下载并填写《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》，发送至service@beyotime.com或碧云天蛋白质组学技术服务人员邮箱。样品的具体要求参见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》。
碧云天iTRAQ技术服务特点
  1. 通量高：可同时对2-8个不同条件样本进行蛋白质差异分析；
  2. 适用范围广：iTRAQ试剂几乎可以与样本中所有的蛋白结合，同时因为是体外标记，所以对各种动植物组织、微生物、血液、体液、细胞培养物以及分泌物等样本均可进行分析；
  3. 灵敏度高：可检测出低丰度蛋白，胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；
  4. 分离能力强：可分离出强酸(碱)性蛋白、＜10KD或＞100KD的蛋白质分子；
  5. 结果准确可靠：二级质谱蛋白序列覆盖率提高，鉴定结果更可靠，同时一个蛋白质有多个肽段被鉴定，进一步提高了定量的准确性；定性与定量同步进行，同时得出鉴定和定量结果，重复样品间的蛋白表达量相关性可达到0.95以上。
碧云天iTRAQ技术服务客户须知
  1. 建议送原始样本，除非客户已经熟练掌握蛋白质组学的蛋白提取方法。
  2. 动物组织样品：湿重不少于200 mg，样品不能溶血，PBS灌注冲洗组织直至去除血液。软骨或骨头等样本，建议不低于400mg。
  3. 植物组织样品：湿重不少于2 g，取材后用PBS冲洗至少3遍直至去除杂质。
  4. 菌体样品：原则上只接受常见无毒菌的菌体样品，菌体沉淀不少于100 mg或者体积不少于100 μL；若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液，按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。
  5. 细胞样品：收集细胞沉淀，PBS冲洗3遍(以防残留血清中的白蛋白影响鉴定结果)，送样量为1×107或细胞沉淀不少于50 μl。
  6. 培养基上清液：需保证无菌体或细胞(用0.2 μm膜过滤)，条件允许可浓缩后再寄送；送样体积不少于10 ml。
  7. 血清样品：新鲜血液取出后，4℃，2000 g，离心15 min，取上清，即得血清；血清制备过程中保证不能溶血；血清体积要求不少于500 μl；制备血清过程中，客户可根据自己样品和实验要求选择是否添加抗凝剂，一般不用添加。
  8. 若客户直接提供蛋白样品，则蛋白量不少于1 mg，浓度不低于2 mg/mL。
  9. 样品的具体要求及寄送条件详见《碧云天蛋白质组学生物送样要求》及《碧云天蛋白质组学生物样品信息表》。
碧云天iTRAQ技术服务流程

碧云天iTRAQ技术服务承诺
碧云天承诺提供：
完整的蛋白质组学实验报告(包括具体实验流程)；
生物信息学分析结果；
蛋白质谱检测原始数据；
蛋白质检报告。
碧云天iTRAQ技术服务应用方向

疾病表型的分子机制研究、药物作用靶点研究、信号转导研究、蛋白质互作研究、分子标志物发掘、蛋白翻译后修饰

应用案例

Gezi Li, et al., Large-scale proteomics combined with transgenic experiments demonstrates an important role of jasmonic acid in potassium deficiency response in wheat and rice, molecular & cellular proteomics, 2017.
应用技术：iTRAQ
IF：6.3