蛋白纯化用于将连接有Flag标签、GST标签或His标签的重组蛋白、包涵体蛋白、抗体从重组蛋白表达系统中高效浓缩分离出来，其中His标签蛋白纯化已有30多年历史。His-Tag蛋白纯化原理是组氨酸（His）的残基上带有1个咪唑基团，可以和Ca2+、Mg2+、Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性的结合在金属离子上，其中Ni2+在亲和纯化实验中的使用最为广泛。用于制备金属螯合介质的配基有很多种，常用的有亚氨基二乙酸(IDA)、次氮基三乙酸(NTA)、三(羧甲基)乙二胺(TED)等。
我们都知道做蛋白纯化是非常考验耐性的工作，对于稍微长些的重力流柱，整个纯化过程将无比漫长。为了解决这个问题，碧云天最新开发了新型的能耐受高流速和高压力的His标签蛋白纯化介质BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)（P2221）和BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)（P2236）。
接下来让小编带大家具体了解下这两款产品吧~
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)
碧云天生产的 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)（P2221）螯合的镍离子，呈蓝色，俗称镍柱，是一种新型的能耐受高流速和高压力的可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白纯化介质。重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型)中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His 标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。
产品效果：
图1. His标签重组蛋白使用BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型) (P2221)的纯化效果示意图。
M：marker；CL：细菌裂解液(cell lysate)；FT：上样穿流液(flow through)；W1-W3：洗涤液1-3 (wash 1-3)；E1-E4：洗脱液1-4 (elution 1-4)。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)
碧云天生产的 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)（P2236），螯合的镍离子，呈蓝绿色，俗称镍柱，是一种能耐受高流速和高压力可以兼容尿素和盐酸胍等强蛋白变性剂，从而可以在非变性或者变性条件下简单、快速、高效并且高特异性地纯化His 标签蛋白的纯化介质。
产品效果：
非变性条件下：
图 2. His 标签重组蛋白使用 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型) (P2236)的纯化效果示意图。M：marker (P0076); CL：细菌裂解液(cell lysate)；FT：上样穿流液(flow through)；W1-W3：非变性裂解液洗涤1-3 (wash 1-3)；W4-W8：非变性洗涤液(非变性裂解液添加 20mM 咪唑)洗涤 4-8；E1-E4：洗脱液(非变性裂解液添加250mM咪唑)洗脱 1-4 (elution 1-4)。
8M 尿素变性条件下
图 3. His 标签重组蛋白使用 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow,耐变性剂型) (P2236)的纯化效果示意图(所用溶液均含有 8M 尿素)。M：marker (碧云天 P0076)；CL：细菌裂解液(cell lysate)；FT：上样穿流液(flow through)；W1-W3：变性裂解液洗涤 1-3；W4-W8：变性洗涤液(变性裂解液添加 20mM 咪唑)洗涤；E1-E4：洗脱液 1-4 (变性裂解液添加 250mM 咪唑)。
6M 盐酸胍变性条件下
图 4. His 标签重组蛋白使用 BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow,耐变性剂型) (P2236)的纯化效果示意图(所用溶液均含有 6M 盐酸胍，各样品电泳前通过透析除去盐酸胍)。M：marker (碧云天 P0076)；CL：细菌裂解液(cell lysate)；FT：上样穿流液(flow through)；W1-W3：变性裂解液洗涤 1-3；W4-W8：变性洗涤液(变性裂解液添加20mM 咪唑)洗涤；E1-E4：变性洗脱液 1-4 (变性裂解液添加 250mM 咪唑)。
产品特点：
▶ 耐受压力强：比之前推出的产品BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)（P2210/P2218/P2220）和BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型)（P2233）更能耐受高流速和高压力。可耐受的最大压力为 0.3MPa，约合 43.5psi，采用固定流速进行蛋白纯化时的最大流速为 300cm/h；
▶ 获得的His标签重组蛋白纯度高：对His 标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，使用本系列产品可以获得高纯度的His 标签重组蛋白；
▶ 获得的His标签重组蛋白容量高：BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型) 最大蛋白结合量为 20-30mg 蛋白/毫升凝胶；BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型) 最大蛋白结合量约为 25-35mg 蛋白(分子量为 55kD 的蛋白)/毫升凝胶；
▶ 非特异性蛋白结合降低：本系列产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(与Sepharose 6 Fast Flow的性能基本一致)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数 Ni-NTA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定；
▶ 镍离子螯合非常稳定：和同类产品相比，本系列产品由于镍离子基本不会流失，重复使用时不需要重新装载镍离子；
▶ 纯化的蛋白使用范围广：纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。
Tips：
除了以上产品使用特点以外，BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐还原螯合型) （P2221）可以很好地耐受DTT 等还原剂以及EDTA 等螯合剂，为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (Fast Flow, 耐变性剂型)（P2236）可以耐受8M 尿素或6M 盐酸胍，可用于非变性条件和变性条件下 His 标签蛋白的纯化。
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