CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是一种原核生物利用RNA引导的DNA核酸酶Cas9对外源的噬菌体或病毒核酸进行基因沉默的获得性免疫系统。CRISPR/Cas9系统由Cas9 Nuclease和gRNA复合物所组成，是一项突破性的基因组编辑技术。近期，碧云天上架了基于CRISPR/Cas9基因编辑技术而研发的用于构建表达Cas9和特定guide RNA (gRNA)的哺乳动物表达质粒的快速构建试剂盒——BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit系列试剂盒。
产品特点：
快捷省时：仅需室温孵育5-10分钟即可完成质粒连接；
方便省心：直接提供线性化载体，用户合成sgRNA后直接连接即可（见图1）；
选择灵活：有BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (mOrange2 Reporter)、BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (Puro)和BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (CD4 Enrichment)三款供大家选择。
图1. BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit系列试剂盒主要操作步骤。
BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (mOrange2 Reporter)
本试剂盒中提供的Linearized pU6-gRNA-Cas9-T2A-mOrange2同时表达靶向目的基因的gRNA、Cas9，以及荧光蛋白mOrange2。mOrange2是一种极其明亮的橙红色荧光蛋白，与mOrange蛋白相比，其蛋白稳定性更高，可以利用mOrange2对表达Cas9和gRNA的细胞进行流式细胞分选或单细胞克隆筛选。
图2. pU6-gRNA-Cas9-T2A-mOrange2质粒图谱。
产品效果：
图2. pU6-gRNA-Cas9-T2A-mOrange2-Control质粒使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)转染293T细胞后的表达效果图。
图3. 碧云天BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (mOrange2 Reporter) (D7085)的连接实测效果图。实验结果表明，使用本试剂盒在室温下连接10分钟即可得到较多的克隆数，且阳性率可达100%。
BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (Puro)
本试剂盒中提供的Linearized pU6-gRNA-Cas9-T2A-Puro同时表达靶向目的基因的gRNA、Cas9，以及抗性基因Puro (PuroR)。可利用嘌呤霉素抗性，使用Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) (ST551)筛选表达Cas9和gRNA的多克隆或单克隆。Puromycin的特点是能快速作用于细胞，通常2天内可以杀死99%的不表达PuroR基因的细胞。
图4. pU6-gRNA-Cas9-T2A-Puro质粒图谱。
产品效果:
图6. 碧云天BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (Puro) (D7087)的连接实测效果图。实验结果表明，使用本试剂盒在室温下连接10分钟即可得到较多的克隆数，且阳性率可达100%。
BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (CD4 Enrichment)
本试剂盒中提供的Linearized pU6-gRNA-Cas9-T2A-CD4同时表达靶向目的基因的gRNA、Cas9，以及CD4。CD4是辅助性T细胞的标志性蛋白，在免疫反应中起着至关重要的作用，并同时在细胞内外环境受到干扰时发挥多种功能，可以参与胸腺中辅助T细胞的发育，并触发单核细胞分化为功能成熟的巨噬细胞。可以利用CD4的抗原特性进行磁珠富集表达Cas9和gRNA的细胞，也可以对表达Cas9和gRNA的细胞通过对CD4的荧光标记进行流式细胞分选和单细胞克隆筛选。
图7. pU6-gRNA-Cas9-T2A-CD4质粒图谱。
产品效果：
图8. 碧云天BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (CD4 Enrichment) (D7086)的连接实测效果图。实验结果表明，使用本试剂盒在室温下连接10分钟即可得到较多的克隆数，且阳性率可达100%。
产品信息：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
| D7085 | BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (mOrange2 Reporter) | 10次 | |
| D7086 | BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (CD4 Enrichment) | 10次 | |
| D7087 | BeyoCRISPR™ Quick Construction Kit (Puro) | 10次 |