碧云天生产的人外周血淋巴细胞分离液(Human Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium)是一种基于密度梯度离心原理，简单、快速、高效地从人外周血、脐带血或骨髓细胞中分离出淋巴细胞和单核细胞等细胞的分离液，也称为淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium, LSM)、淋巴细胞梯度分离液、Density gradient medium、PBMC分离液、PBMC样本密度分离液或PBMC细胞分离液。本分离液的密度为1.077g/ml (20ºC)，与外周全血近于等渗。本分离液和Ficoll-Paque 1.077、Ficoll-Hypaque、Histopaque-1077等在功能和使用方法上几乎完全一致。

人外周血细胞包括红细胞(Red blood cell, RBC, 即Erythrocyte)、白细胞(White blood cell, WBC, 即Leukocyte)和血小板(Platelet)。红细胞是血液中数量最多的一类血细胞，是血液运送氧气最主要的媒介，哺乳动物成熟的红细胞是无核的；白细胞是一种不均一的细胞群，生理学上根据其形态、功能和来源分为多核的粒细胞(Granulocyte，包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)及单核的细胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC，包括淋巴细胞(Lymphocyte)和单核细胞(Monocyte))；血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆裂解脱落下来的小块胞质，体积很小，具有凝血、止血功能[1]。

淋巴细胞是体积最小的白细胞，约占白细胞的20-40% [2]。淋巴细胞由淋巴器官产生，主要存在于淋巴管中循环的淋巴液里，是具有特异免疫识别功能的细胞系，在机体抗炎症、抗感染及抗肿瘤等免疫过程中发挥着重要作用[3,4]。根据发生迁移、表面分子和功能的不同，淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞三大类。其中T淋巴细胞和B淋巴细胞均来自造血组织。T淋巴细胞参与细胞免疫(Cell-mediated immunity)，主要免疫功能包括抗胞内感染、抗瘤细胞和异体细胞等。目前有重要临床应用的CAR-T (Chimeric antigen receptor T cell，嵌合抗原受体T细胞)就是一种基于T淋巴细胞的细胞免疫疗法。B淋巴细胞参与体液免疫(Humoral immunity)，其主要功能是产生抗体，提呈抗原及分泌细胞因子参与免疫调节；NK细胞由骨髓中的淋巴干细胞分化而来，可直接发挥细胞毒性效应，杀伤病毒感染细胞、肿瘤细胞和异体细胞。淋巴细胞检测是临床血常规项目之一，淋巴细胞异常提示细菌感染、病毒感染、淋巴细胞系统增殖性疾病、再生贫血障碍等。因此，分离和检测淋巴细胞具有重要临床意义。

人外周血中不同血细胞的体积、形态和比重(密度)有所差异：红细胞和粒细胞的比重较大，约1.092；单核的细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重约为1.075，血小板约为1.030 [5]。因此利用一种分离液，其比重在1.075-1.090之间，淋巴细胞和单核细胞由于比重较小在这种分离液中浮起，而红细胞和粒细胞的比重较大，在该分离液中将下沉，从而将单核的细胞从外周血细胞中分离出来。最常用的分离液是采用聚蔗糖(Polysucrose 400/Ficoll 400)和泛影酸钠(Sodium diatrizoate)配制的混合比重约1.070的溶液[6]。

碧云天的人外周血淋巴细胞分离液经过一定的配方优化和改良，20ºC时的密度约为1.077g/ml，和外周血近于等渗。通过本分离液进行密度梯度离心，离心管中的细胞或液体由上至下分四层：血浆和血小板密度较低，悬浮于分离液的上部，为第一层；单核的细胞(PBMC，包含淋巴细胞和单核细胞)的密度稍低于分离液，位于分离液界面之上，一般为环状乳白色，为第二层，所以移去第一层就可获得PBMC；第三层为透明分离液层；红细胞与粒细胞密度较大，沉于底部，为第四层。

图1. 人外周血淋巴细胞分离液(C0025)分离人外周血效果示意图。

本产品操作简单，操作时间短，分离率高。整个实验只需要简单的移液、离心操作，即可在约1个小时内完成样品淋巴细胞的分离。本产品对于淋巴细胞分离的提取率大于80%。如需获得高纯度目的细胞，可配合使用免疫磁珠进行分选。使用本试剂盒预分离，可减少磁珠的使用量，降低成本。

本产品品质高，质量控制严格。本分离液使用药用级原料，配方经过优化处理，无菌，内毒素小于0.5EU/ml。

本产品应用范围广。本产品不仅适用于稀释后的抗凝血液样品，也可用于未经稀释的抗凝血液样品；可分离淋巴细胞，还可分离一定纯度的血浆；分离得到的淋巴细胞可直接检测，也可进行细胞培养。

按使用说明操作，样品体积为5ml时，200ml本产品可进行约40次淋巴细胞分离。

室温避光保存，两年有效。本产品严禁冷藏或冷冻保存。

使用本产品前须颠倒混匀，并在无菌条件下吸取，避免微生物污染。

如果要对分离的淋巴细胞进一步培养，须在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。

本产品宜室温保存，严禁冷藏冷冻保存。低温条件下，本产品会出现白色结晶，影响分离效果。

由于本产品在低温时密度升高，而在高温的时候密度会降低，因此使用本产品的温度要求是18-22ºC，最佳分离温度是20ºC。

不同血液样品，分离效果不同。相比外周血，脐带血由于离体时间较长、运输等因素可能导致其分离效果不佳。血液样品宿主的身体状况、使用药物情况、患病情况及性别等因素均可能影响分离效果。

部分塑料的离心管(如聚苯乙烯, PS)带有静电，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。推荐使用碧云天聚丙烯材质的离心管(FTUB515/FTUB550)。

为避免细胞活性降低和提高淋巴细胞分离效果，请选用不含有钙镁离子的缓冲液或生理盐水对血液样品进行稀释。

由于不同种属动物免疫细胞密度的差异，本产品仅适用于人外周血淋巴细胞分离，不适用于其它动物。不同动物血液须选用特定的分离液。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。