碧云天生产的BacTiter-Lumi™ Plus发光法微生物细胞活力检测试剂盒(BacTiter-Lumi™ Plus Luminescent Microbial Cell Viability Assay Kit)，简称BacTiter-Lumi Plus或BTL Plus，是一种通过化学发光法测定微生物细胞内ATP含量从而用于超高灵敏度、超宽线性范围定量检测培养物中具有活力的微生物细胞数目的试剂盒。本产品广泛用于检测细菌、真菌等微生物污染、微生物生长速度和抗微生物化合物活性，筛选抗微生物化合物，以及以更高的灵敏度和更宽的线性范围快速定量细菌、真菌等微生物。

本产品的用途与碧云天的同类产品BacTiter-Lumi™ Luminescent Microbial Cell Viability Assay Kit (简称BacTiter-Lumi或BTL Plus)及Promega公司的BacTiter-Glo™ Microbial Cell Viability Assay (简称BacTiter-Glo或BTG)基本相同。

本产品为all in one的预混液，可以直接使用，无需在使用前进行溶液的配制。

本产品信号强度高，稳定性好。本产品的发光信号强度和发光信号的稳定性都显著优于国外同类产品(Competitor P)。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。对于相同的微生物细胞样品，本产品的发光效果比国外同类产品Competitor P强约30-200%，实测效果的差异会因微生物细胞种类的不同有所不同。例如对于大肠杆菌(DH5α)的检测，BacTiter-Lumi Plus的发光效果比国外同类产品Competitor P强约35-50% (图1A)；而对于酵母菌(Y187)的检测，BacTiter-Lumi Plus的发光效果则比国外同类产品Competitor P强约100-150% (图1C) 。

图1. BacTiter-Lumi™ Plus发光法微生物细胞活力检测试剂盒(BacTiter-Lumi Plus)和国外同类产品(Competitor P)对不同微生物细胞的检测效果。图A和图C分别为BacTiter-Lumi Plus和Competitor P对不同数量的大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)的化学发光强度的检测效果对比图，图B和图D分别为BacTiter-Lumi Plus和Competitor P对大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)的化学发光稳定性的检测效果对比图。孵育时间均为20分钟，实际检测效果会因微生物细胞种类、培养基的差异、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品的检测灵敏度高，线性范围宽，对于大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)可以在10到10¹¹个菌的范围内呈现良好的线性关系。使用本产品检测大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)时，菌的数量仅为100个/孔时的信号强度即可以达到空白孔的信号强度的1.2-1.5倍。由于不同微生物细胞中的ATP含量不同，或者细胞内ATP含量的影响因素如生长阶段、培养基、以及代谢抑制物的存在等，都会影响微生物细胞数和萤光的关系，所以不同的微生物细胞的检测数量上下限可能会有显著不同。本产品对大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)的检测效果参见图2。如果样品中的微生物数量比较多，也可以考虑使用性价比更高的BacTiter-Lumi™发光法微生物细胞活力检测试剂盒(C0052)。

图2. BacTiter-Lumi™ Plus发光法微生物细胞活力检测试剂盒对大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)的检测效果图。本产品对不同数量大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)在白色96孔板中的检测效果见图A。本产品对大肠杆菌(DH5α)和酵母菌(Y187)的化学发光稳定性的检测效果见图B。实际读数会因微生物种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约5-25分钟。本产品比CCK-8等其它微生物活力测定方法更加简单快捷。只需把试剂盒提供的单一即用型试剂BacTiter-Lumi™ Plus发光法检测试剂与例如培养在培养基中的微生物样品等体积混合，反应5-25分钟后即可进行化学发光检测，一般5分钟即可，但20-25分钟时发光信号更稳定。无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。并且化学发光比较稳定，其信号半衰期随菌株和培养基等的不同而有所差异，一般超过40分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒中的BacTiter-Lumi™ Plus发光法检测试剂稳定性好，优于BacTiter-Lumi，反复冻融10次、4℃保存7天及室温保存1天对检测效果都基本无影响，室温保存3天检测效果下降不超过10%，室温保存7天检测效果下降不超过20%。37℃保存1天，可保持90%以上的检测效果，37℃保存3天可保留70%以上的检测效果。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅可以用于单管检测，也可用于多孔板形式的高通量筛选(high-throughput screening)检测。

本产品特别适用于对微生物的超高灵敏度监测。BacTiter-Lumi™ Plus检测的超高灵敏度和超宽线性能够在接种后立即监测大肠杆菌的生长。分别用BacTiter-Lumi™ Plus检测和吸光度法监测和对比大肠杆菌(DH5α)的增殖情况，检测效果参考图3。用酶标仪在600nm测定吸光度，用BacTiter-Lumi™ Plus检测菌液的萤光发光。通常，大肠杆菌接种后1.5小时吸光度值才会有明显的差异，而BacTiter-Lumi™ Plus在接种后立即检测得到的萤光信号可以达到空白培养基的5-15倍左右，发光信号的差异可能会因微生物细胞种类、微生物接种密度、微生物培养液等条件的不同而略有差异。

图3. BacTiter-Lumi™ Plus发光法微生物细胞活力检测试剂盒对大肠杆菌(DH5α)的生长监测效果图。将过夜培养的大肠杆菌按照1:100的比例接种于新鲜的LB培养基中，250rpm振荡37℃培养，在不同时间点取样后4℃保存，与最后一个点取样后一起检测。200μl样品加入透明的96孔板用酶标仪测定OD600， 100μl样品加入BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)用BacTiter-Lumi™ Plus检测菌液的活力。吸光度法测定大肠杆菌增殖情况见图A，本产品测定大肠杆菌增殖情况见图B。实际读数会因微生物种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

ATP，作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP是细胞新陈代谢的一个重要指标，也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子，并和活细胞数目成良好的线性关系。每个活的微生物细胞中ATP的含量大致相同，微生物细胞死亡后，ATP迅速分解，不会对活体微生物的测定产生影响。因此，ATP含量能很好地反应微生物活细胞的数目，即本试剂盒可以通过测定ATP含量来检测微生物细胞活力。

本试剂盒通过ATP检测微生物细胞活力的原理参考图4。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应，ATP可以通过测定化学发光强度来进行定量。由于ATP含量能很好地反映微生物活细胞的数目，而ATP含量和发光强度成正比，这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出微生物细胞活力或微生物细胞数目。

图4.BacTiter-Lumi™ 发光法微生物细胞活力检测试剂盒检测ATP的原理图。

本产品可以用于检测液体培养物中微生物的总体活力，也可以用于检测水、饮料、食品、器皿表面等是否存在微生物污染超标的问题。

对于96孔板，推荐使用100μl微生物细胞培养液和100μl的检测试剂，总体积为200μl，此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板，推荐使用25μl微生物细胞培养液和25μl的检测试剂，总体积为50μl，此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测，但微生物培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。

-20℃避光保存，至少一年有效。

本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会显著影响后续的检测效果。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前微生物样品和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。可将检测试剂在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。多孔板中培养的微生物也同样需要充分平衡至室温，否则多孔板中心的孔和四周的孔之间会存在温度梯度，从而影响萤光的信号强度和信号稳定性。

待测的各种抗微生物活性的化合物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的微生物培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终检测体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

请使用适合于微生物培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，化学发光检测时相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

使用说明中提供了检测ATP标准品的方法，实际检测微生物细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。