碧云天的BeyoAIE™细胞核绿色荧光染色试剂盒，即BeyoAIE™ Cell Nuclear Green Fluorescence Staining Kit，是一种快速、高效、便捷的基于BeyoAIE™ Nuclear Green Probe特异地对死细胞或固定后的细胞或组织样品的细胞核进行染色的试剂盒。本试剂盒可使用含有相关检测通道的荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测。

聚集诱导发光(Aggregation-induced emission, AIE)是由中国科学院院士唐本忠教授于2001年提出的原创性新科学概念。具有AIE效应的材料，在分散态下发光微弱甚至不发光，聚集后发光显著增强，呈现出颠覆传统认知的光物理现象。目前AIE已成为生物学、医学、化学、材料等领域的研究热点，多次入选全球热点前沿研究领域[1-3]。

AIE系列荧光探针有如下特点。1. 聚集诱导发光。AIE荧光探针在溶液及细胞环境中能保持微弱的荧光信号，而进入细胞并与目标结构结合聚集后，其荧光信号会大幅度增强，因此在成像过程中可以忽略溶液及细胞中未与特定结构结合的荧光分子，从而在染色后通常可以直接进行成像，无需多次洗涤，可以显著简化成像流程。2. 较大的斯托克斯(Stokes)位移。AIE荧光探针在荧光成像中能够极大程度地避免信号串扰和自淬灭现象，显著提高荧光成像清晰度，从而进一步提升成像精确度。3. 极佳的光学稳定性。AIE荧光探针能在长时间的细胞成像过程中维持稳定的荧光信号输出，特别适用于长期追踪、多次扫描的荧光成像实验。4. 抗淬灭能力强。与传统荧光探针相比，AIE荧光探针能有效规避浓度过高导致的荧光淬灭问题，在高浓度应用场景更有竞争力[4-6]。

本试剂盒中含有RNase A等核糖核酸酶，能有效消除BeyoAIE™ Nuclear Green Probe对于样品中RNA的染色，使细胞核染色效果更好。

BeyoAIE™ Nuclear Green Probe，是一种新型的非细胞膜通透性的细胞核荧光探针，不能穿过具有生物活性的细胞质膜，但可穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋，从而产生明亮的绿色荧光。因此，BeyoAIE™ Nuclear Green Probe仅对死细胞或经通透处理的固定后的细胞染色，从而能用于区分正常细胞与坏死细胞。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe对具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞的细胞核染色时需固定并通透处理，然后才能染色。由于BeyoAIE™ Nuclear Green Probe结合DNA的同时也可以结合RNA，因此对细胞核染色时，还需要酌情使用RNase A等先去除RNA，使BeyoAIE™ Nuclear Green Probe仅对DNA染色，从而用于细胞核的荧光染色。

BeyoAIE™ Nuclear Green Probe是一种基于聚集诱导发光荧光材料的三苯氨基衍生物，具有典型的聚集诱导发光效应特性。本探针在进入细胞之前荧光信号非常弱，在进入细胞并与细胞核DNA双螺旋结合前后由于聚集状态的变化其荧光强度会产生极为明显的变化。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe被激发后可以发出绿色的荧光，与DNA结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。其中，最大激发波长为455nm，最大发射波长为551nm。

图1. BeyoAIE™ Nuclear Green Probe和DNA结合后的激发光谱与发射光谱。

本试剂盒可以染色死细胞或固定并通透后的细胞和组织的细胞核，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定液(P0099)进行固定，使用其它固定液可能会导致荧光背景较高。本试剂盒对固定后的L929细胞核的染色效果请参考图2。

图2. 碧云天BeyoAIE™细胞核绿色荧光染色试剂盒(C2105)染色L-929细胞中细胞核的效果图。图A为L-929细胞在明场下的形态图；图B的绿色荧光为BeyoAIE™ Nuclear Green Probe染色的细胞核。注：L-929细胞须经固定并通透处理后再使用本产品进行了染色。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

使用本试剂盒染色大鼠坐骨神经冷冻切片细胞核的效果请参考图3。

图3. 碧云天BeyoAIE™细胞核绿色荧光染色试剂盒(C2105)染色大鼠坐骨神经冰冻切片细胞核的效果图。图A为大鼠坐骨神经在明场下的形态图；图B的绿色荧光为BeyoAIE™ Nuclear Green Probe染色的细胞核；图C的蓝色荧光为Hoechst 33342染色的细胞核。本试剂盒不提供Hoechst 33342，如有需要，可自行选购Hoechst 33342染色液相关产品(C1022/C1025-C1029)等。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒中提供DNase-free的RNase A (50X)，可配制在BeyoAIE Staining Solution中用于固定、通透处理后细胞或组织切片样品上使用，孵育时间为15-30分钟。

对于细胞样品，按照96孔板每孔检测体系的总体积为100μl时，本试剂盒小包装和中包装分别可以进行100次和500次检测。

-20ºC保存，一年有效。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe (1000X)须避光保存。Assay Buffer也可4ºC保存，至少1个月有效。

与传统染料不同，AIE染料“斯托克斯”位移较大，可能不适配部分常规荧光显微镜的成像通道，通常建议使用共聚焦显微镜或流式细胞仪进行检测。

由于组织样品的特殊性，其固定、通透及探针浓度等条件需要进行一定的优化。

荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。

Assay Buffer经过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果Assay Buffer发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

BeyoAIE™ Nuclear Green Probe (1000X)为荧光染料，首次使用时可以根据需要适当进行分装，尽量避免反复冻融，操作时请注意避光。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。