碧云天生物技术-BeyoOrganoid无血清类器官细胞冻存液(C5515-100ml)

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BeyoOrganoid™无血清类器官细胞冻存液

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
C5515-100ml	BeyoOrganoid™无血清类器官细胞冻存液	100ml	629.00元

碧云天的BeyoOrganoid™无血清类器官细胞冻存液(BeyoOrganoid™ Serum-free Cell Freezing Medium for Organoid)，是一款化学成分确定，无血清或其它蛋白成分的即用型类器官细胞冻存液，可适用于多种来源的类器官细胞的冻存。本产品为碧云天BeyoOrganoid™类器官培养液系列产品的配套试剂。碧云天同时提供含有血清的BeyoOrganoid™类器官细胞冻存液(C5517)。

细胞冻存液，也称细胞培养冻存培养基或细胞冻存培养液等，英文名为Cell Culture Freezing Medium、Cell Freezing Solution或Cell Cryopreservation Medium等。

类器官(Organoid)通常指在体外显示出与体内器官或组织相似结构和功能的复杂三维(Three-dimensional, 3D)结构[1]，更严格的定义是指由干细胞或器官祖细胞发育而来的，作为体外平台模拟其对应器官的结构和功能等多个方面的3D细胞培养物[2]。类器官在形成过程中，细胞自我组建(Self-organize)并分化为功能型的微小细胞团，模拟真实器官发育，以与体内相似的方式由细胞分序(Cell sorting out)与空间特异性的谱系分化(Spatially restricted lineage commitment)调控，需激活由细胞内在成分和外在环境(细胞外基质、培养液等)介导的各种信号通路[3]。

本产品性能佳，可保持高细胞活性和回收率。本产品为碧云天研发的保密配方，不含牛血清、无蛋白质成分、不含任何动物源性物质(Animal origin-free, AOF)，含DMSO。经测试，本产品有效提高了类器官细胞的冻存活率和细胞解冻后的回收率。

本产品批次质量稳定，一致性佳。本产品由GMP-like级别车间生产制备，每个批次都经过严格的质量把控，可满足类器官细胞的冻存和复苏性能需求。

本产品经0.22μm无菌过滤，其渗透压为2000–2400mOsm/kg。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C5515-100ml	BeyoOrganoid™无血清类器官细胞冻存液	100ml
—	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，一年有效。

注意事项：

需自备细胞冻存盒、细胞冻存管、15ml离心管等。推荐使用碧云天的BeyoCool™细胞冻存盒(FCFC012/FCFC015/FCFC021/FCFC026)、BeyoGold™细胞冻存管(FCV011/FCV016/FCV021/FCV028/FCV041/FCV058)、15ml离心管(FTUB515)、BeyoGold™ 5毫升移液管(无菌, 独立纸塑包装) (FPIP105)。

请确保冻存前类器官或细胞生长情况良好，例如处于对数生长期的细胞，并且冻存时存活率大于90%。

实验过程中用于洗涤等步骤的类器官基础培养液也可以使用Advanced DMEM/F-12 (C2739)。

建议类器官或细胞冻存在液氮中，可以长时间进行保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.类器官的冻存。
a.将待冻存的类器官细胞按类器官的传代和扩增方法，从类器官基质胶悬滴中收集类器官并去除基质胶。
b.如果从多孔收获并冻存类器官，则将多个生长状态类似的类器官沉淀加入类器官基础培养液重悬后集中到一个15ml离心管中，轻轻吹打混匀，300×g室温离心3分钟。
c.每1×106个活细胞或每100-200μl类器官/基质胶悬滴，用0.5-1ml BeyoOrganoid™类器官细胞冻存液(C5517)重悬沉淀。
d.使用移液管将类器官重悬液按每管0.5-1ml分装至细胞冻存管(FCV011/FCV016/FCV021/FCV028)中。推荐LAB MARKER (耐酒精记号笔, 0.4/1.0mm) (FPP21/FPP23/FPP25)进行标记，特别适合细胞复苏时使用70-75%乙醇对冻存管表面进行消毒。
e.将冻存管转移至细胞冻存盒中进行程序降温后转移至液氮罐中长期保存。类器官冻存时，程序降温速度以1ºC/分钟为宜，推荐使用具有降温速度为1ºC/分钟的BeyoCool™细胞冻存盒(FCFC012/FCFC015/FCFC021)系列产品进行程序性降温冻存，并在-80ºC放置至少24小时后转移至液氮中保存。
2.类器官的复苏。
a.将冻存管在37ºC水浴锅中迅速完全融化(保持冻存管的盖子在液面以上以防止污染)，并适当轻轻摇晃促融，切勿vortex。快速、完全融化可以提高细胞的复苏效果。
b.打开冻存管前时用70%酒精擦拭细胞冻存管外壁，注意某些记号笔不耐酒精，小心标注的记号被擦拭掉。推荐LAB MARKER (耐酒精记号笔, 0.4/1.0mm) (FPP21/FPP23/FPP25)进行标记，特别适合细胞复苏时使用70-75%乙醇对冻存管表面进行消毒。
c.将完全融化的细胞溶液转移至含有预热的10ml类器官基础培养液的15ml无菌离心管中，并额外使用1ml类器官基础培养液冲洗冻存管，合并冲洗液至15ml离心管中。
d.300×g室温离心3分钟，吸除上清，注意不要吸走类器官细胞沉淀。
注1：离心管应置于冰上操作。
注2：如果在冻存时基质胶没有去除彻底，则在离心后可能存在一层混浊的基质胶。如果显微镜下没有观察到基质胶层中有大量的类器官细胞，应将基质胶层去除。反之，如果基质胶层中观察到类器官细胞，则需进行额外的清洗。额外的清洗步骤为加入10ml类器官基础培养液，吹吸混匀，然后重复步骤2d。
e.将细胞沉淀使用基质胶重悬，参照类器官培养液的使用说明进行类器官培养，或根据后续实验需求，加入适量预热的对应类器官完全培养液重悬细胞，轻轻吹匀后转移至培养器皿中，放入细胞培养箱中培养。
参考文献：
1.Rossi G, Manfrin A, Lutolf MP. Nat Rev Genet. 2018. 19(11):671-687.
2.Gu Y, Zhang W, Wu X, Zhang Y, Xu K, et al. Clin Transl Med. 2023. 13(12):e1499.
3.Corrò C, Novellasdemunt L, Li VSW. Am J Physiol Cell Physiol. 2020. 319(1):C151-C165.
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