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核酸相关> 菌种与质粒> 基因表达质粒
pCMV-Cre-mCherry
产品编号: D2607-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2607-1μg pCMV-Cre-mCherry 1μg 888.00元
D2607-100μg pCMV-Cre-mCherry 100μg 1169.00元

pCMV-Cre-mCherry是碧云天自行研发的含有CMV启动子的用于在哺乳动物细胞中表达带有mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的Cre Recombinase (Cre重组酶)的表达质粒。来自条件性基因敲除(conditional knockout) 小鼠等含有预先插入loxP位点的细胞在转染本质粒后,本质粒表达的Cre Recombinase可以导致两个loxP位点间的基因删除,从而实现条件性基因敲除(conditional gene knockout)。

Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase),也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase),它可识别34bp的loxP位点(两端为两个13bp的反向重复序列(inverted repeats),中间是8bp的间隔区(图1)并催化loxP位点之间的DNA发生重组;重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同,两个含单loxP位点的DNA将发生融合:两个正向重复的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割,而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转(图2)。

图1. loxP位点序列图。Cre重组酶与两端13bp反向重复序列(小写字母)结合,中间是8bp不对称中心间隔区(大写字母),箭头所示为Cre重组酶的酶切位点。

图2. Cre-loxP位点特异性重组示意图。

pCMV-Cre-mCherry质粒转染HeLa细胞后的荧光表达效果,可以看到mCherry标签的Cre重组酶主要分布在细胞核中(图3)。

图3. pCMV-Cre-mCherry质粒转染HeLa细胞后的表达效果图。左图为明场照片,中图为荧光照片,右图为叠加照片。

本质粒为卡那霉素抗性,转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-Cre-mCherry质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Cre recombinase 677-1705
mCherry 1718-2428
multiple cloning site 2340-2488
T7 promoter and T7 primer binding site 2532-2553
SV40 polyA signal 2565-2948
f1 origin of ss-DNA replication 3086-3390
bla promoter 3415-3539
SV40 promoter 3559-3897
neomycin/kanamycin resistance ORF 3932-4723
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 4724-5182
pUC origin 5311-5978

pCMV-Cre-mCherry质粒(6030bp)的图谱如下:

pCMV-Cre-mCherry的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2607 pCMV-Cre-mCherry.pdf

pCMV-Cre-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-Cre-mCherry)包括:

AflII AscI BaeI BlpI BmgBI BsiWI BspEI
BspQI BstXI BstZ17I EarI EcoNI FseI NotI
PmeI PmlI PpuMI PspXI SacII SapI ScaI
SmaI SrfI SwaI TspMI XmaI

pCMV-Cre-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Cre-mCherry)包括:

AccI GT`MK,AC 2454 Esp3I CGTCTCN`NNNN, 1360
AclI AA`CG,TT 1047 HindIII A`AGCT,T 2430
AfeI AGC|GCT 660 HpaI GTT|AAC 2825
AhdI GACNN,N`NNGTC 1911 MfeI C`AATT,G 2812
AleI CACNN|NNGTG 2360 MluI A`CGCG,T 2948
ApaI G,GGCC`C 2488 NdeI CA`TA,TG 240
AsiSI GCG,AT`CGC 1133 NheI G`CTAG,C 597
BamHI G`GATC,C 1032 NruI TCG|CGA 891
BbsI GAAGACNN`NNNN, 2153 PaeR7I C`TCGA,G 2465
BbvCI CC`TCA,GC 2256 PaqCI CACCTGCNNNN`NNNN, 1286
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 1079 PflFI GACN`N,NGTC 4178
BclI T`GATC,A 2719 PflMI CCAN,NNN`NTGG 2154
BglII A`GATC,T 2460 PshAI GACNN|NNGTC 1512
BmtI G,CTAG`C 597 PspOMI G`GGCC,C 2483
BsaI GGTCTCN`NNNN, 5049 SacI G,AGCT`C 651
BsgI GTGCAG(N)14,NN` 2310 SalI G`TCGA,C 2454
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 1360 SbfI CC,TGCA`GG 2069
BsrGI T`GTAC,A 2418 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3832
BssHII G`CGCG,C 918 SgrAI CR`CCGG,YG 2399
BtsI GCAGTG,NN` 2899 SpeI A`CTAG,T 2478
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 380 Tth111I GACN`N,NGTC 4178
DraIII CAC,NNN`GTG 3175 XbaI T`CTAG,A 2472
EagI C`GGCC,G 3966 XcmI CCANNNN,N`NNNNTGG 2403
Eco53I GAG|CTC 653 XhoI C`TCGA,G 2466
EcoRI G`AATT,C 2442 XmnI GAANN|NNTTC 885

如需对pCMV-Cre-mCherry质粒中插入片段Cre-mCherry进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:

T3 primer (620-639): 5' AATTAACCCTCACTAAAGGG 3'

T7 primer (2532-2553): 5' GTAATACGACTCACTATAGGGC 3'

pCMV-Cre-mCherry的全序列信息:D2607 pCMV-Cre-mCherry 全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2607-1µg pCMV-Cre-mCherry 1μg
D2607-100µg pCMV-Cre-mCherry 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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