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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
BeyoFast™ HhaI
产品编号: D5733-100μl
产品包装:100μl
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价格: ¥ 158.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D5733-100μl BeyoFast™ HhaI 100μl 158.00元

碧云天生产的BeyoFast™系列快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5-15分钟内仅使用一种缓冲液就能快速完成DNA酶切的高品质限制性内切酶。

BeyoFast™系列快速内切酶适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。

BeyoFast™系列快速内切酶具有如下优点。(1) 5-15分钟内就能完成酶切;(2) 所有BeyoFast™系列内切酶共用一种酶切缓冲液CutEZ™ Buffer,大大简化酶切反应体系,方便进行双酶切或多酶切;(3) 针对不同酶在CutEZ™ Buffer中活性存在差异的问题,调整了不同酶的浓度,可以统一按照每20μl体系加入1μl酶量的用量进行酶切反应;(4) Alkaline Phosphatase、Antarctic Phosphatase、T4 DNA Ligase、T4 Polynucleotide Kinase、T4 PNK (3' phosphatase minus)等很多修饰酶等都100%兼容CutEZ™ Buffer (具体的兼容性表请参考https://www.beyotime.com/product/D6018.htm),使“酶切-连接”和“酶切-修饰-连接”等反应体系可以兼容,支持一管化反应;(5)良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。

酶活性检测:最适反应温度下,在20μl反应体系中,1μl BeyoFast™ HhaI能够在15min内完全消化1μg λDNA。

图1. 碧云天生产的BeyoFast™ HhaI (D5733)酶活性实测效果图。20μl反应体系中包含1μg λDNA (48502bp),以及如图所示不添加或添加1µl BeyoFast™ HhaI,分别使用1X CutEZ™ Buffer和1X Easy-Load™ CutEZ™ Buffer,37ºC孵育15分钟进行酶切反应,65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并使用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)进行核酸染色,再进行荧光成像分析。所使用的DNA marker为DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110)。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

长时间酶切检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ HhaI与1μg λDNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1μl BeyoFast™ HhaI消化底物,回收酶切产物,在22ºC下使用适量T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ HhaI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

蓝白斑检测:将含有单一lacZα基因的载体以1μl BeyoFast™ HhaI消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于BeyoFast™系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。

BeyoFast™ HhaI快速内切酶基本信息如下:

识别序列[1] 同裂酶 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
5'-GCG^C-3'
3'-C^GCG-5'
AspLEI, BstHHI, CfoI, Hin6I, HinP1I, HspAI 37ºC 65ºC 20min 有时有干扰

BeyoFast™ HhaI快速内切酶在不同反应缓冲液中的活性(缓冲液兼容性)如下:

Beyotime CutEZ™ Buffer Beyotime Easy-Load™ CutEZ™ Buffer Thermo FastDigest Buffer NEB CutSmart® Buffer Takara QuickCut™ Buffer
100% 100% 100% 100% 100%

注:活性数据来自碧云天BeyoFast™系列快速内切酶的标准反应体系下的检测。

BeyoFast™ HhaI快速内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:

Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI
无影响 无影响 序列完全重叠,剪切阻断 无影响 无影响
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D5733-100μl BeyoFast™ HhaI 100μl
D6018-1ml 10X CutEZ™ Buffer 1ml
D6020-1ml Easy-Load™ 10X CutEZ™ Buffer 1ml
- 说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系,在冰浴上进行操作。
Reagent Plasmid DNA PCR Product Genomic DNA
Ultrapure Water (17-x)µl (26-x)µl (40-x)µl
10X CutEZ™ Buffer or
Easy-Load™ 10X CutEZ™ Buffer
2µl 3µl 5µl
Substrate DNA xµl (up to 1µg) xµl (~0.2µg) xµl (5µg)
BeyoFast™ HhaI 1µl 1µl 5µl
Total volume 20µl 30µl 50µl
Incubate at 37ºC 15min 15-30min 30-60min
注:上述反应体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物有一定的离子强度和pH,10X CutEZ™ Buffer加入量可适当减少至2μl。但由于很多DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行连接、克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
a. 参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
b. 37ºC温育15min (质粒),或15-30min (PCR产物),或30-60min (基因组DNA)。酶切反应时优先推荐使用水浴,反应温度通常更加恒定一些。
c. 65ºC温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
2. 双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上,参考如下原则设置反应体系。
a. 每种快速内切酶的用量为1μl,并根据需要适当扩大反应体系。
b. 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
c. 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先从最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
参考文献:
1. Horton JR, Yang J, Zhang X, Petronzio T, Fomenkov A, et al. Nucleic Acids Res. 2020. 48(3):1466-1478.
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