碧云天生产的Exonuclease I，即核酸外切酶I，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种大肠杆菌来源的，能够特异催化单链线性DNA (Single-strand linear DNA)从3'到5'方向降解的核酸外切酶[1]。

Exonuclease I对底物具有高度选择性，只能特异催化具有3'-OH末端的单链线性DNA沿3'到5'方向降解，同时逐步释放单个dNMP，直至5'端残留两个脱氧核苷酸；不能酶解3'端被其它基团修饰封闭的单链DNA，也不能水解双链DNA和RNA [2, 3]。

Exonuclease I常用于在PCR反应后或测序反应前，消除体系中残留的过量单链DNA引物；但不能用于带有3'粘性末端的双链DNA的末端平滑，推荐使用碧云天DNA末端平滑试剂盒(D7012)，或T4 DNA Polymerase (D7052)等进行双链DNA粘性末端的末端平滑处理，也称平末端化处理。

Exonuclease I主要用于单链DNA从3'到5'方向逐步切除单个核苷酸；对于单链DNA/RNA从3'到5'方向降解或将带有3'突出末端的双链DNA或双链RNA生成平末端，推荐使用碧云天的Exonuclease T (D6003)；对于单链DNA从5'到3'方向的降解或部分消除双链DNA的5'单链突出末端，推荐使用碧云天RecJf Exonuclease (D6006)；对于双链或单链DNA从5'到3'方向的降解，推荐使用碧云天T5 Exonuclease (D7082)；对于带有5'磷酸化修饰的双链或单链线性DNA的降解，推荐使用碧云天Lambda Exonuclease (D7084)；对于双链DNA从5'到3'方向的消化，推荐使用碧云天Exonuclease VIII, truncated (D7088)。

碧云天的Exonuclease I (D6000)识别并酶切单链DNA的示意图请参考图1。

图1.碧云天Exonuclease I (D6000)识别并酶切单链DNA的示意图。

碧云天的Exonuclease I (D6000)催化降解单链DNA的效果可参考图2。

图2.碧云天Exonuclease I (D6000)催化降解单链DNA的效果图。在20µl反应体系(67mM Glycine-KOH, 6.7mM MgCl2, 10mM DTT (pH9.5 @ 25ºC))中加入2nmol长度为42nt的单链DNA，适量BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Exonuclease I，37ºC孵育30分钟进行反应，反应完成后80ºC孵育20分钟以终止反应。取反应后产物5μl，加入5μl DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)，进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳60分钟)，随后使用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的Exonuclease I产品相比，具有类似的消化降解单链DNA的效果。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中效果仅供参考。

用途：常用于PCR反应产物中单链引物的去除；在进行Sanger DNA测序或SNP分析之前，去除PCR反应体系中的单链引物；去除样品中的单链线性DNA，保留双链DNA；分析样品中3'-羟基末端单链DNA [3]。

来源：纯化自携带编码大肠杆菌Exonuclease I基因的E. coli重组菌株。

纯度：不含除Exonuclease I以外的其它种类DNA/RNA内切酶和外切酶，不含磷酸酯酶。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will catalyze the release of 10nmol of acid-soluble nucleotide in a total reaction volume of 50μl in 30 minutes at 37ºC in 1X Exonuclease I Reaction Buffer with 0.17mg/ml single-stranded [3H]-DNA。

酶储存液：10mM Tris-HCl，100mM NaCl，5mM DTT，0.5mM EDTA，100µg/ml BSA，50% Glycerol (pH7.5 @ 25ºC)。

10X Reaction Buffer：670mM Glycine-KOH，67mM MgCl2，100mM DTT (pH9.5 @ 25ºC)。

失活或抑制：80ºC孵育20分钟可使Exonuclease I失活。

-20ºC保存，两年有效。

本产品提供的试剂均用不含DNA酶和RNA酶的水配制，可直接用于单链线性DNA从3'到5'方向的消化。

Exonuclease I对作用底物具有高度选择性，仅特异催化3'末端为羟基的单链DNA从3'到5'方向的降解，不能催化3'末端带有其它修饰基团的单链DNA的消化，也不能作用于双链DNA和RNA。请务必选择特定类型的底物，使用Exonuclease I进行酶切反应。

Exonuclease I不适用于水解双链DNA，对于含二级结构的单链DNA需变性才能被水解。

Exonuclease I的最佳反应温度是37ºC，在80ºC条件下孵育20分钟可使其完全失活。

Exonuclease I在普通PCR buffer中也具有活性，适用于PCR产物中引物或其他单链的去除；也可以与碱性磷酸酶如碧云天BeyoAP Alkaline Phosphatase (D7027)配合使用，在去除测序或SNP反应体系中过量单链引物的同时，可使dNTP去磷酸化而失活，以免干扰后续反应。

碧云天同时在售多种类型核酸外切酶，请根据底物类型及实验需求，自主选择合适的核酸外切酶产品进行酶切反应。

超纯水推荐选购碧云天的BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。