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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7020S | T7 DNA Ligase | 150KU | 286.00元 |
| D7020M | T7 DNA Ligase | 600KU | 789.00元 |
| D7020L | T7 DNA Ligase | 3000KU | 3158.00元 |
碧云天生产的T7 DNA Ligase，即T7 DNA连接酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于T7噬菌体的、ATP依赖的双链DNA连接酶，并且对于粘性末端的连接效率远远高于平末端。
与T3和T4 DNA Ligase不同，T7 DNA Ligase仅可催化双链DNA相邻粘性末端5'磷酸和3'羟基磷酸二酯键的形成，但不能有效催化平末端双链DNA的连接，加入大于或等于20%的PEG6000可以适当提高该酶的平末端DNA连接活性。因此在平末端和粘性末端双链DNA底物同时存在，且仅需连接粘性末端双链DNA的分子生物学实验中，T7 DNA Ligase是理想的选择[1,2]。
碧云天生产的T7 DNA Ligase用于进行双链DNA粘性末端连接的效果参考图1。
图1. 碧云天生产的T7 DNA Ligase用于进行双链DNA粘性末端连接的效果图。A. 碧云天生产的T7 DNA Ligase与N公司(Competitor)催化产生的重组连接产物转化DH5α感受态后涂LB平板的实测效果图。利用碧云天生产的BeyoFusion™ DNA Polymerase (D7220)，使用一端带有Hind III酶切识别位点，另一端带有Xba Ⅰ酶切识别位点的引物对靶基因进行PCR扩增，随后使用碧云天Hind Ⅲ (D6389)/ Xba Ⅰ(D6713)对1kb的PCR产物进行双酶切，获得两端带有粘性末端的双链线性DNA分子，作为T7 DNA Ligase催化连接反应的底物。在20µl反应体系(66mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 1mM ATP, 7.5% Polyethylene glycol (PEG6000), PH7.6 @25℃)中，分别加入50ng经PCR扩增及Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切产生的两端带有粘性末端的双链DNA片段，和经Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切线性化的pUC18载体混合(PCR片段与pUC18载体的摩尔比为3:1)，加入10µl的2X Reaction Buffer以及1μl的本产品或N公司(Competitor)的T7 DNA Ligase，然后用水补至20µl，25℃孵育30分钟进行连接。反应结束后，取5µl连接产物转化DH5α超级感受态细胞(D1031)。B. 菌落PCR鉴定T7 DNA Ligase重组连接构建得到的克隆。实验结果表明，本产品与N公司的产品克隆阳性率一致，具有相当的连接粘性末端双链线性DNA的效果。菌落PCR使用的是pUC18的通用测序引物M13 forward sequencing primer(5´-GTAAAACGACGGCCAGT-3´)和M13 reverse sequencing primer (5´-CAGGAAACAGCTATGAC-3´)。本图仅供参考，实际检测效果可能有所不同。
用途：限制性内切酶切DNA片段的克隆，双链DNA和接头的连接，线性双链DNA的环化，双链DNA的缺刻修复、定点突变和Transcription Activator-Like Effector Nucleases(TALEN)的DNA片段的Golden Gate Assembly、粘端特异性连接等。
来源：纯化自携带编码T7噬菌体DNA ligase的E.coli重组菌株。
活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of 100ng HindIII fragments of λ DNA in a total reaction volume of 20μl in 30 minutes at 25℃ in 1X T7 DNA Ligase Reaction Buffer.
纯度：不含除T7 DNA Ligase之外的其它种类的DNA连接酶，不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
酶储存液：10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol (pH7.4 @25℃)。
2X Reaction Buffer:132mM Tris-HCl, 20mM MgCl2, 2mM DTT, 2mM ATP, 15% Polyethylene glycol (PEG6000) (pH7.6 @25℃)。
失活或抑制：在不含有PEG6000的反应体系中65℃孵育10分钟。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7020S-1 | T7 DNA Ligase (3KU/μl) | 50µl |
| D7020S-2 | 2X Reaction Buffer | 0.5ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7020M-1 | T7 DNA Ligase (3KU/μl) | 200µl |
| D7020M-2 | 2X Reaction Buffer | 2ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7020L-1 | T7 DNA Ligase (3KU/μl) | 1ml |
| D7020L-2 | 2X Reaction Buffer | 10ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，两年有效。
注意事项：ATP是T7 DNA Ligase发挥催化活性所必需的辅助因子，而不是像E.coli DNA Ligase以NAD作为辅助因子的。
T7 DNA Ligase不能有效催化平末端双链DNA片段的连接，对于平末端双链DNA的连接建议使用T4 DNA Ligase。
T7 DNA Ligase的催化底物是双链DNA，不能用于单链DNA或RNA的连接反应。
T7 DNA Ligase的反应体系中含有7.5% PEG6000。如果实验体系中不能加入PEG6000，可考虑自行配制不含PEG6000的连接反应缓冲液，或者使用T4 DNA Ligase的连接缓冲体系，但T7 DNA Ligase连接酶在T4 DNA Ligase的连接缓冲体系中的活性会降低约10倍。
反应体系所需的超纯水推荐使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Volume |
| 2X Reaction Buffer | 10µl |
| Vector DNA | Xμl (0.020pmol) |
| Insert DNA | Yμl (0.060pmol) |
| Ultrapure Water | (9-X-Y)μl |
| T7 DNA Ligase (3KU/μl) | 1µl |
| Total Volume | 20µl |
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