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多肽与蛋白> 蛋白表达与纯化> 脱盐
BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱
产品编号: P2629-5pcs
产品包装:5个
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价格: ¥ 146.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2629-5pcs BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱 5个 146.00元
P2629-20pcs BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱 20个 428.00元

碧云天的BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱,即BeyoDesalt™ 6FF Mini Desalting Column,是一种简单、快速、高效地使用Beyorose™ 6FF基质分离大分子量物质与小分子量物质的预包装即用型层析柱,俗称脱盐柱,主要用于去除病毒颗粒、大分子量蛋白质、超螺旋DNA、多糖等样品的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。本脱盐柱使用的填料为Beyorose™ 6FF,填料粒径为45-165μm,可分离分子量>400kDa的蛋白质或其它大分子样品,柱床体积为2.1ml,建议上样量为0.1-0.5ml,本产品适用于重力法或离心法。

本产品采用的是Beyorose™ 6FF基质,该基质是高度交联的6%琼脂糖(Agarose),与Sepharose 6 Fast Flow的性能基本一致。本产品用于分离样品时,体积较大的大分子不能进入基质网状筛孔而被阻隔在基质凝胶之外,随着流动溶液沿着基质凝胶颗粒间的缝隙移动,下移速度较快,先被洗脱出柱;体积较小的分子或离子可以进入基质网状筛孔从而进入凝胶内部,随着流动溶液在凝胶颗粒的网孔内移动,因此小分子量物质在基质内停留时间更长,下移速度较慢,后被洗脱出柱,这种分离纯化方式被称为尺寸排阻层析(Size-exclusion chromatography, SEC),也常被叫做分子筛层析(Molecular sieve chromatography, MSC)或凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography, GFC) [1-2] (图1)。

图1. 碧云天BeyoDesalt™脱盐柱的工作原理图。

本产品的基本信息如下表:

基质(Matrix) Beyorose™ 6FF
填料粒径(Bead size) 45-165μm
分离范围(Exclusion limit) Mw > 400kDa (Mw: molecular weight, also mentioned as Mr: relative molecular mass)
建议上样量(Recommended sample volume) 0.1-0.5ml
样品稀释倍数(Sample dilution) 2-10
柱床体积(Column volume, CV) 2.1ml
柱床尺寸(Column dimensions) 0.9×6.3cm
柱床内径(Column i.d.) 8.9mm
化学稳定性(Chemical stability) All commonly used buffers; Avoid oxidizing agents
pH稳定性(pH stability) pH2-13
使用方法(Operation) Gravity or Spin
保存条件(Storage) 20% ethanol at 4-30ºC

碧云天提供多种类型的脱盐柱,不同类型脱盐柱的比较和选择请参见下表:

Product Name BeyoDesalt™
Classification Multi Spin (96 well) Spin Mini Midi Max Superfine Fine
Diagram
Matrix Beyodex™ G-25 M
Beyorose™ 6FF
G-25 M
6FF
G-10
G-25 M
6FF
G-10
G-25 M
6FF
G-25 M
6FF
G-25 SF
6FF
G-25 F
6FF
Resolution ★★★ ★★★★★ ★★★★
Spin*** Sample volume 70-130μl 0.2-0.5ml 0.75-1.5ml 1.75-2.5ml Not Applicable
Elution volume 70-130μl 0.2-0.5ml 0.75-1.5ml 1.75-2.5ml
Dilution factor 1
Gravity Sample volume Not Applicable 0.1-0.3ml*
0.1-0.5ml**
0.4-1ml*
0.5-1.5ml**
1-2.5ml
Elution volume 1ml 2ml 3.5ml
Dilution factor 2-10 1.3-3 1.5-3.5
Syringe Sample volume Not Applicable Not Applicable 0.25-1.5ml Not Applicable
Elution volume 1-2ml
Dilution factor 1.3-4
AKTA
System
Sample volume Not Applicable Not Applicable 0.25-1.5ml 2-20ml
Elution volume 1-2ml 10-30ml
Dilution factor 1.3-4 1.5-5
Number of columns
used in series
Not Applicable 1-5 columns

* Beyodex™ G-10; ** Beyodex™ G-25, Beyorose™ 6FF; *** Beyodex™ G-10 Not Applicable for Spin protocol.

碧云天提供3种基质类型的脱盐柱,不同类型基质截留分子量(Molecular Weight Cut-off, MWCO)的比较和选择请参见下表:

Matrix MCWO Catalog Number
Multi Spin Spin Mini Midi Max Superfine Fine
Beyodex™ G-10 >0.7kDa / / P2605 P2607 / / /
Beyodex™ G-25 >5kDa P2611 P2613 P2615 P2617 P2619 P2621 P2623
Beyorose™ 6FF >400kDa P2625 P2627 P2629 P2631 P2633 P2635 P2637

碧云天BeyoDesalt™ 6FF系列脱盐柱7种型号的比较和选择请参见下表:

Serial Name BeyoDesalt™ 6FF
Classification Multi Spin
(96 well)
Spin Mini Midi Max Superfine Fine
Cat. No. P2625 P2627 P2629 P2631 P2633 P2635 P2637
Beads size 45-165μm
Volume of resin 500μl 500μl 2.1ml 5.3ml 8.3ml 5ml 70ml
Packed bed dimensions / / 0.9×6.3cm 1.3×6.6cm 1.6×8.3cm 1.6×2.5cm 2.6×18cm
Column volume 800μl 800μl 5ml 8.5ml 13.5ml 5ml 70ml
Maximum sample volume 130μl 130μl 0.5ml 1.5ml 2.5ml 1.5ml 20ml
Recovery 70-90% 70-90% 70-95% 70-95% 70-95% 95% 95%
Desalting capacity >85% >90% >95%
Plate/column material polypropylene
Storage solution 20% ethanol
Storage temperature 4-30ºC

本脱盐柱显著优于传统半透膜透析方法。①分离速度快、节省时间:脱盐柱可以对样品进行快速分离,处理一个样品通常只需要5分钟,而半透膜透析至少需要6小时;②适合小体积操作、样品回收率高:脱盐柱可以有效处理0.1-0.5ml的小体积样品,回收率通常>90%,但是半透膜透析后释放样品时会有部分样品粘附在半透膜上,无法完全回收,因此不适合小体积样品;③节省溶液:半透膜透析时需要大量的缓冲液,但是脱盐柱仅需10ml缓冲液即可完成实验。

本脱盐柱有重力法和离心法两种使用方式,可根据实验需求进行选择(图2)。①重力法:样品利用重力流经脱盐柱,操作简单,设备要求低,样品回收率比离心法稍高,但样品会发生约1.4倍的稀释;②离心法:样品利用离心力流经脱盐柱,样品回收率比重力法稍低,但样品不会被稀释。

图2. 碧云天BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱(P2629)的重力法和离心法两种使用方法示意图。重力法中的脱盐柱上端可通过Syringe Connector (针筒型层析柱接头) (FC007)与10ml注射器空柱管(FS810)连接用于柱平衡(图B),或下端可通过Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS701-FS750)组装后用于柱平衡(图C),或在下端连接30ml鲁尔接口注射器,上端连接30ml注射器空柱管用于柱平衡(图D)。离心法中脱盐柱可直接放入15ml收集管(FTUB515)组装后使用(图E)。注射器法中脱盐柱上端需要Syringe Connector (针筒型层析柱接头) (FC007)与10ml注射器空柱管(FS810)连接,下端需要Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS701-FS750)组装后使用(图C)。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P2629-5pcs BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱 5个
P2629-20pcs BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱 20个
- 说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,两年有效。室温保存,至少一个月有效。

注意事项:

为防止交叉污染,本产品建议一次性使用。

脱盐柱反复使用,可能会导致样品回收率降低。

请勿冷冻保存本产品,冻结会导致脱盐柱的基质碎裂。

保存和纯化过程中应始终保持基质湿润,避免气泡进入脱盐柱中。

建议在缓冲液中加入25mM NaCl,以防止潜在的离子间相互作用。如不能使用NaCl,可以尝试加入100mM乙酸铵(NH4Ac)或100mM碳酸氢铵(NH4HCO3)挥发性缓冲液。

当缓冲液中盐浓度>1M时,疏水性物质在柱子内的停留时间可能会延长或与基质结合。

当缓冲液中含有>1.5M (NH4)2SO4时,脱盐柱基质可能会发生收缩。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 样品的准备。
样品上样前需通过离心或0.45μm滤膜去除不溶物。
注1:在常规缓冲液中,高至70mg/ml的蛋白样品或5mg/ml的葡聚糖高分子聚合物,不会影响分离效果。
注2:在样品粘度不高的情况下,样品浓度不会影响分离效果,样品浓度越高则回收率越高,低浓度样品回收率可能会降低。
注3:样品回收率与样品种类直接相关,通常情况下70%-90%的样品回收率属于正常现象。
注4:平衡使用的缓冲液即为样品存储缓冲液。
2. 重力法。
a. 脱盐柱的准备:首先移除脱盐柱的下堵头,然后将脱盐柱的下端浸没到缓冲液中,再移除脱盐柱的上堵头,然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
注1:如果不先移除脱盐柱的下堵头,脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
注2:如果移除脱盐柱的上堵头时,脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中,负压气泡可能会进入脱盐柱中。
b. 使用重力柱支架(适合3ml层析柱,16孔) (FRK045)或铁架台固定脱盐柱,并将其置于烧杯或试管上方。
c. 脱盐柱的预平衡:重力平衡法或注射器平衡法,选择一种方法即可。
(a)重力平衡法:向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管,每次约2ml,待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后,再次倒入缓冲液充满柱管,重复此步骤3-4次。
注:可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将10ml注射器空柱管(FS810)连接到脱盐柱上方(图3B),增加溶液储量,一次性倒入8ml缓冲液以平衡脱盐柱。
(b)注射器平衡法:
脱盐柱下端通过Female Luer Connector (双母鲁尔接头) (FC009)与Luer Syringe (鲁尔接口注射器) (FS730)连接(图3C)。向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管,每次约2ml,然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱,待缓冲液几乎全部进入脱盐柱时,再次倒入缓冲液充满柱管,然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱,重复此步骤3-4次。
注1:可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将10ml注射器空柱管(FS810)连接到脱盐柱上方(图3D),增加溶液储量,一次性倒入8ml缓冲液以平衡脱盐柱。
注2:拉动鲁尔接口注射器推杆的速度控制在0.5-1ml/分钟为宜。
注3:拉动鲁尔接口注射器推杆过程中应始终保持基质湿润,避免空气进入脱盐柱中。
d. 上样:待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后,移液器吸头贴近脱盐柱上筛板中央加入0.5ml样品,如果上样体积不足0.5ml,待样品全部进入脱盐柱后,需要贴近脱盐柱上筛板中央补入“(0.5 - X) ml”的缓冲液,此时的流穿液无需收集
注1:X为上样体积,如果上样体积X为0.3ml,那么需要补入“0.5 – 0.3 = 0.2 ml”的缓冲液。
注2:样品注入方式会直接影响样品回收率。上样时需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中,在上筛板的中央加入样品。
e. 洗脱:待柱管中的样品或补齐的缓冲液全部进入脱盐柱后,将1.5ml收集管置于脱盐柱下方,向脱盐柱中加入约2ml缓冲液,此时的流穿液需要收集,每管收集0.25ml。
3. 离心法。
a. 脱盐柱的准备:首先移除脱盐柱的下堵头,然后将脱盐柱的下端浸没到缓冲液中,再移除脱盐柱的上堵头,然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
注1:如果不先移除脱盐柱的下堵头,脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
注2:如果移除脱盐柱的上堵头时,脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中,负压气泡可能会进入脱盐柱中。
b. 使用重力柱支架(适合3ml层析柱,16孔) (FRK045)或铁架台固定脱盐柱,并将其置于烧杯或试管上方。
c. 脱盐柱的预平衡:向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管,每次约2ml,待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后,再次倒入缓冲液充满柱管,重复此步骤2-3次。
注:可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector) (FC007)将10ml注射器空柱管(FS810)连接到脱盐柱上方(参考图B/D),增加溶液储量,一次性倒入8ml缓冲液以平衡脱盐柱。
d. 用镊子(FS019)取出上垫片,再次倒入缓冲液充满柱管,将脱盐柱放入15ml收集管(FTUB515)中,无需盖盖子,1,000×g离心2分钟,倒出离心管内的液体。
注:使用非水平转头的情况下,由于离心会使树脂压实形成一个向上的斜面,该斜面的方向宜在后续步骤中保持,所以在脱盐柱外壳上的斜面向上位置做标记,在随后的离心步骤中需要调整好离心管的放入方向,确保离心后斜面的方向和位置不会改变。
e. 上样:移液器吸头贴近树脂的中心位置缓慢加入0.2-0.5ml样品,使脱盐柱中的树脂吸入样品。
注1:样品体积不能超过脱盐柱规定的样品量体积,否则会降低样品回收率。
注2:样品注入方式会直接影响样品回收率,需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中,在贴近树脂的中心位置加入样品。
f. 洗脱:将脱盐柱放入新的15ml收集管(FTUB515)中,无需盖盖子,1,000×g离心2分钟,此时的流穿液需要收集
4. 检测。
可通过的A280nm紫外吸收值(如NanoDrop)、Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)、SDS-PAGE凝胶电泳配合考马斯亮蓝染色液(P0017F)等方法检测样品所在的收集管。
5. BeyoDesalt™ 6FF Mini脱盐柱的清洗和保存。
为防止交叉污染,本脱盐柱建议一次性使用。如需重复使用脱盐柱,实验完成后,先用25ml或更多H2O,接着用25ml 20%乙醇清洗脱盐柱,安装并拧紧脱盐柱的上堵头和下堵头,将脱盐柱置于4ºC或室温保存。
参考文献:
1. Barth HG, Boyes BE, Jackson C. Anal Chem. 1994. 66(12):595R-620R.
2. Hagel L, Janson J C. Journal of Chromatography Library. Elsevier. 1992. 51: A267-A307.
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