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超氧化物检测试剂盒
产品编号: S0060
产品包装:100次
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价格:¥558.00元
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S0060 超氧化物检测试剂盒 100次 558.00元

超氧化物检测试剂盒(Superoxide Assay Kit)是一种用于超氧化物快速高灵敏度检测的试剂盒。
本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-1产生可溶性有色物质为基础来检测超氧化物。本试剂盒的检测试剂中添加了Catalase(触酶)等,可以清除过氧化氢等过氧化物对WST-1显色的干扰,使测定结果更加准确。并且本试剂盒还提供SOD(超氧化物歧化酶),可以验证本试剂盒测定出的结果是否为超氧化物,以排除检测体系中所用的一些试剂可能产生的干扰。对于本试剂盒,加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。
WST-1是一种类似于MTT的化合物,可以被超氧化物还原生成橙色的formazan。超氧化物产生越多越快,则颜色越深,即相应测定得到的吸光度值越大。
使用WST-1作为检测试剂比用传统的细胞色素c(cytochrome c)检测超氧化物具有多方面的优点。首先,WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450为0.02左右,因仪器和酶标板不同而有所不同),而细胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550为0.5左右),因此,使用WST-1与细胞色素c相比,检测灵敏度高很多倍。其次,WST-1的还原产物是稳定的可溶性产物,且对细胞基本无毒性,使WST-1方法更加适合于高通量的筛选。另外,细胞色素c法由于灵敏度的限制,一般不适合用96孔板测定,而WST-1法可以用96孔板测定,使检测更加便捷。用WST-1法或细胞色素c法对超氧化物测定效果比较参考图1。图1中,50万/毫升嗜中性粒细胞在37℃用PMA刺激指定时间,用WST-1或细胞色素c方法分别测定。WST-1法测定OD450,而细胞色素c法测定OD550。另外,WST-1法和luminol法相比,灵敏度相近,但仅须使用普通的酶标仪,无须使用luminol法所需的luminometer,并且检测速度也比luminol法更加快捷。
超氧化物通常指超氧化物阴离子(superoxide anion)O2.-,是一种氧分子的自由基。在呼吸链中,NADPH氧化酶把电子传递给氧分子的时候,就会产生超氧化物阴离子O2.-。超氧化物阴离子O2.-是一种强氧化剂,可以由被刺激的白细胞等产生,从而抵御微生物的感染等。超氧化物阴离子O2.-也可以导致氧化损伤,和许多疾病的发生密切相关。
本试剂盒可以测定100个样品。


图1. WST-1法和细胞色素c法对于超氧化物测定效果的比较。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
S0060-1 超氧化物检测缓冲液 30ml
S0060-2 WST-1溶液 1ml
S0060-3 Catalase溶液 200μl
S0060-4 SOD溶液 20μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
WST-1溶液、Catalase溶液和SOD溶液均宜尽量避免反复冻融,可以适当分装。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. 超氧化物检测工作液的配制:
按照下表比例配制超氧化物检测工作液:


1个检测 5个检测 10个检测 20个检测 50个检测
超氧化物检测缓冲液 200微升 1毫升 2毫升 4毫升 10毫升
WST-1溶液 10微升 50微升 100微升 200微升 500微升
Catalase溶液 2微升 10微升 20微升 40微升 100微升
超氧化物检测工作液 212微升 1.06毫升 2.12毫升 4.24毫升 10.6毫升

2. 悬浮细胞产生超氧化物的检测:
a. 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
b. 约按5-10万个细胞/毫升的比例,用超氧化物检测工作液悬浮细胞。
c. 在96孔板中,每孔加入200微升用超氧化物检测工作液悬浮的细胞,每孔约1-2万个细胞。
d. 37℃孵育3分钟。
e. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:


细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液
空白对照
待测样品
阴性对照

f. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。
3. 贴壁细胞产生超氧化物的检测:
a. 约按每孔5000-10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中,使第二天或待检测时细胞为80-90%满。
b. 吸去培养液,用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。
c. 每孔加入200微升超氧化物检测工作液,37℃孵育3分钟。
d. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物,如PMA等,刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系,加SOD溶液的检测可以不做。试剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表:


细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液
空白对照
待测样品
阴性对照

e. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

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