化学信息：
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化学名
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6-chloro-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-1-carboxamide
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简称
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EX 527
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别名
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EX-527; EX527 cpd; Selisistat; SEN0014196; SIRT1 Inhibitor III; HY-15452
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中文名
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－
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化学式
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C13H13ClN2O
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分子量
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248.71
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CAS号
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49843-98-3
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纯度
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100.0%
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溶剂/溶解度
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Water <1mg/ml; DMSO 50mg/ml; Ethanol 18mg/ml
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溶液配制
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5mg加入2.01ml DMSO，或者每2.49mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0281-10mM用DMSO配制。
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生物信息：
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产品描述
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EX 527 (Selisistat)是一种有效的，选择性SIRT1抑制剂，无细胞试验中IC50为38nM，比作用于SIRT2和SIRT3选择性高200倍以上。Phase 2。
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信号通路
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Epigenetics; DNA Damage
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靶点
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SIRT1
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－
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－
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－
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－
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IC50
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38nM
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－
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－
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－
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体外研究
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EX 527有效抑制SIRT1去乙酰化酶活性，IC50为38nM，这种作用存在浓度依赖性，而抑制SIRT2和SIRT3时，效果低很多，IC50分别为19.6μM和48.7μM。EX 527浓度高达100μM时也不抑制SIRT4-7和I/II类 HDAC活性。1μM EX-527单独作用于NCI-H460细胞，不能检测p53在lysine 382位点的乙酰化作用。EX-527作用于受遗传毒性试剂Etoposide、Adriamycin、Hydroxyurea和H2O2影响的NCI-H460细胞，人类乳腺上皮细胞，U-2 OS和MCF-7细胞，显著提高乙酰化p53的量。但是EX 527在p53控制的基因表达、细胞存活或细胞增殖方面没有检测效果。EX 527在0.1%血清而不是10%血清中处理7天，作用于HCT116细胞，显著提高细胞数，提高达90%，说明在无细胞因子的情况下，SirT1是细胞增殖的显著调节器。EX 527作用于INS-1E细胞，废除白藜芦醇对葡萄糖的反应的影响，且抑制白藜芦醇诱导的Glut2、葡萄糖激酶、Pdx-1和Tfam的上调，因为EX 527和白藜芦醇作用于SIRT1脱乙酰基酶活性的作用是相反的。
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体内研究
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EX 527按10μg剂量作用于大鼠，通过抑制下丘脑SIRT1活性而提高下丘脑乙酰化-p53水平。EX 527和Ghrelin联用处理，通过降低pAMPK水平，提高ACC水平及废除转录因子FoxO1、pCREB和Bsx，以及下丘脑弓状核中的神经肽NPY和AgRP的更高水平表达，而显著减弱生长素的促进食欲功效。
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临床实验
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N/A
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特征
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与其他SIRT1抑制剂相比，EX 527有效性、特定性和稳定性更高，且毒性更低。
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相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
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酶活性检测实验
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方法
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在pDEST27 Gateway载体中使用FuGENE-6使293T细胞短暂转染GST标记的人SIRT1。48小时后，用50mM Tris pH 8.0，120mM NaCl，1mM EDTA和0.5% Nonidet P-40溶解细胞，加入完整Mini蛋白酶抑制剂片。使用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶珠从溶解物中纯化GST-SIRT1，然后在以上buffer中进行冲洗。在EX 527 (48pM到100μM)存在时，使用30ng GST-SIRT1进行脱乙酰反应。使用Fluor de Lys试剂盒，使用包含p53的379到382残基，且在lysine 382位点乙酰化的荧光肽，测定脱乙酰作用。使乙酰化赖氨酸残基与一部分aminomethylcoumarin进行耦合。SIRT1使肽段脱乙酰化，随后加入蛋白水解显影剂，释放荧光aminomethylcoumarin。酶和170μM NAD+及100μM p53荧光肽在37℃下温育45分钟，随后在显影剂中温育15分钟。分别在460nM处测定荧光值，用相对荧光单位表示酶活性。
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细胞实验
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细胞系
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NCI-H460、MCF-7、U-2 OS和HMEC
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浓度
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溶于DMSO，终浓度为1μM
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处理时间
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48或72h
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方法
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测定细胞活力，用EX 527处理细胞48小时。通过细胞Titer-Glo荧光实验测定细胞活力，测定全部ATP水平，作为细胞数的一个指数。在Luminoskan Ascent读数仪上测定荧光值。测定增殖实验中，在培养基中加入EX 527，然后立即加入0.5μCi/ml[14C]胸甘。在Microbeta液体闪烁计数器上测量，在48小时(测定HMEC)或72小时(测定NCI-H460、MCF-7和U-2 OS细胞)测定实验板。在Cytostar-T组织培养板上通过接近闪烁体而测定渗透到细胞的胸甘。
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动物实验
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动物模型
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雄性Sprague-Dawley大鼠
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配制
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溶于DMSO，总体积为5μl
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剂量
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5μg
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给药方式
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脑室内注射
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参考文献：
1. Solomon JM, et al. Mol Cell Biol. 2006; 26(1):28-38.
2. Kabra N, et al. J Biol Chem. 2009; 284(27):18210-18217.
3. Vetterli L, et al. J Biol Chem. 2011; 286(8):6049-6060.
4. Velásquez DA, et al. Diabetes. 2011; 60(4):1177-118.
包装清单：
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产品编号
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产品名称
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包装
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SC0281-10mM
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EX 527 (Selisistat) (SIRT1抑制剂)
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10mM×0.2ml
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SC0281-5mg
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EX 527 (Selisistat) (SIRT1抑制剂)
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5mg
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SC0281-25mg
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EX 527 (Selisistat) (SIRT1抑制剂)
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25mg
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说明书
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1份
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保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
注意事项：
本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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