使用说明：
1.对于悬浮细胞：
a.在进行完细胞凋亡刺激后，1000×g (约1000-2000rpm)离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。注意：PBS重悬不能省略，PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用，可以保证后续Annexin V-mCherry的结合。
b.取5-10万重悬的细胞，1000×g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-mCherry Binding Buffer轻轻重悬细胞。
c.加入5μl Annexin V-mCherry，轻轻混匀。
d.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善标记效果。
e.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-mCherry为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测，1000×g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-mCherry Binding Buffer轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。注意：细胞在染色后须尽快完成检测，通常宜在1小时之内完成检测。用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-mCherry单独染色时出现了过多的其它通道假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-mCherry稀释3-10倍后再进行检测。
2.对于贴壁细胞：
a.把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。
b.加入步骤2a中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000×g离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。注意：加入步骤2a中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-mCherry导致染色失败。
c.取5-10万重悬的细胞，1000×g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-mCherry Binding Buffer轻轻重悬细胞。
d.加入5μl Annexin V-mCherry，轻轻混匀。
e.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善标记效果。
f.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-mCherry为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测，1000×g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-mCherry Binding Buffer轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。注意：细胞在染色后须尽快完成检测，通常宜在1小时之内完成检测。用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-mCherry单独染色时出现了过多的其它通道假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-mCherry稀释3-10倍后再进行检测。
3.对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测：
注：本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡，缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。
a.
(选做)如果条件许可，把细胞培养于24孔板、48孔板或96孔板内。在凋亡诱导结束后，用可以对多孔板进行离心的离心机1000×g离心5分钟。
b.吸除细胞培养液，加入PBS洗涤一次。如果条件许可，在吸除PBS前1000×g离心5分钟。
c.加入195μl Annexin V-mCherry Binding Buffer。
d.加入5μl Annexin V-mCherry，轻轻混匀。
e.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟。可以使用铝箔进行避光。
f.随即在荧光显微镜下观察，Annexin V-mCherry为红色荧光。注意：细胞在染色后须尽快完成检测，通常宜在1小时之内完成检测。
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