使用说明:
1.透析袋的选择。
a.选择合适的截留分子量:透析袋截流分子量的选择一般是预留在膜内大分子分子量的1/2-1/3原则,即如果目的蛋白为42kDa,那么应该选择截流分子量为21或14kDa或以下的透析袋,才可有效保证目的蛋白不会丢失。
b.选择扁平宽度和长度:透析袋扁平宽度和长度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析袋透析更快,较大的透析袋因扩散距离较长透析较慢。一般建议使用总长度(包括透析夹和顶部空间)为大约10-20厘米的透析袋。
2.透析袋的预处理。
a.根据被透析样品体积和透析袋单位长度体积,剪取适当长度的透析袋小段,一般为10-20厘米。
注:需要预留约占总样品体积量的20%作为顶部空间,也要为透析袋两端的透析夹预留一定长度。
b.将透析袋浸没于装有适当体积的透析袋处理液(2% NaHCO
3, 1mM EDTA, pH8.0)的容器中将透析袋沸水浴处理10分钟。实验要求不高时也可使用简易处理方法:直接在蒸馏水中煮10分钟,然后蒸馏水洗3次即可使用。
c.蒸馏水充分洗涤沸水浴处理后的透析袋。
d.将透析袋放于装有1mM EDTA (pH8.0)溶液的容器中再次沸水浴处理10分钟。
e.冷却后,短期不使用,可以转移至蒸馏水或20%乙醇中,放于4℃待用,并确保透析袋始终浸没于液面下。长期不使用,可以将透析袋浸没在75%乙醇中,4℃保存。从此步骤起取用透析袋时必须戴洁净手套,以免污染。
f.浸泡在储存液中的透析袋使用前,须将透析袋内装满蒸馏水然后排出以清洗干净,内外冲洗三次即可使用。
3.透析袋的使用。
本使用流程是一个基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多因素,如透析样品溶剂、膜的化学兼容性、膜的截留分子量、透析溶剂、透析体积、温度等因素都会影响透析速率和效果,实际透析过程可能需要适当的优化。
a.将适量的透析液加入容器中(透析液的体积应为被透析样品体积的约100倍,例如需透析10ml的样品,需1L透析液)。
b.把透析袋一端开口处约1-2cm处用下一个透析夹夹紧,灌满水后,用手指适当加压,确定不会出现明显渗漏以后,才可以去除水并装入样品。
c.将样品由另一端开口处装入透析袋中,然后用另外一个透析夹将透析袋的另外一个端口夹紧。
注:通常要留部分的空间即顶部空间,如总样品体积量的20%,以防透析过程中,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将透析袋撑破。
d.将装有被透析样品的透析袋转移至预先装有透析液的容器中,确保其被透析液完全浸没(如下图所示)。
e.在适当的温度下透析样品。建议总透析时间大于12小时,期间至少更换透析液3次,通常每4小时更换一次(有必要的时候可以透析过夜后再换液)。最后一次透析液的更换后至少再透析2小时。
注1:设置适当的透析温度以提升透析的效率。对于高浓度样品,可适当延长透析时间,并增加透析液更换的频率。
注2:为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁力搅拌器搅动透析液和透析袋以增加透析液更换的频率。
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