使用说明:
1. 根据目的蛋白的分子量大小选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶(即分离胶)。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下:
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150kD |
8%胶 | 30-90kD |
10%胶 | 20-80kD |
12%胶 | 12-60kD |
15%胶 | 10-40kD |
2. 称取适量凝胶聚合催化剂,用双蒸水或其它高纯度的水配制10%凝胶聚合催化剂溶液。例如称取0.1g凝胶聚合催化剂,用高纯度水溶解并定容到1ml即为10%凝胶聚合催化剂溶液。凝胶聚合催化剂溶液容易失效,具体请参考注意事项中相关说明。
3. 参考下表,在10% SDS-PAGE下层胶预混液中,按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液,按照0.04%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10ml 10%SDS-PAGE下层胶预混液中,加入100μl 10%凝胶聚合催化剂溶液和4μl TEMED Substitute。适当混匀后倒入到制胶模具中,用异丙醇、0.1% SDS或蒸馏水封住液面,直至下层胶凝固充分。通常10-30分钟内胶会凝固。注:具体的凝固时间和温度及光照有关,说明书中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25℃时的推荐用量。为达到与25℃时相近的凝固时间,当室温低于25℃时,可以适当同时加大10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,例如20℃时建议用量是正常推荐用量的1.5倍,15℃时建议用量是正常推荐用量的2倍。
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
10% SDS-PAGE下层胶预混液 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
10%凝胶聚合催化剂 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED Substitute | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.012 | 0.02 |
4. 参考下表,在下层胶凝固后,在SDS-PAGE上层胶预混液中,按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液,按照0.1%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10ml SDS-PAGE上层胶预混液中,加入100μl 10%凝胶聚合催化剂溶液和10μl TEMED Substitute,适当混匀。去除下层胶上面覆盖的液体,尽量去干净,然后倒入添加了10%凝胶聚合催化剂溶液和TEMED Substitute的SDS-PAGE上层胶预混液,插入梳子待凝固。上层胶凝固后,则表明制胶步骤结束,可以准备进行后续的电泳了。
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
SDS-PAGE上层胶预混液 | 2 | 3 | 4 | 6 | 8 | 10 |
10%凝胶聚合催化剂 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
TEMED Substitute | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |
5. 配制好的凝胶如果当天不能使用,可以在4℃保存1-2天后使用。
相关产品:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P0012A | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0012AC | SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0676-250ml | 6% SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml |
P0676-500ml | 6% SDS-PAGE下层胶预混液 | 500ml |
P0678-250ml | 8% SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml |
P0678-500ml | 8% SDS-PAGE下层胶预混液 | 500ml |
P0670-250ml | 10% SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml |
P0670-500ml | 10% SDS-PAGE下层胶预混液 | 500ml |
P0672-250ml | 12% SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml |
P0672-500ml | 12% SDS-PAGE下层胶预混液 | 500ml |
P0675-250ml | 15% SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml |
P0675-500ml | 15% SDS-PAGE下层胶预混液 | 500ml |
P0683-250ml | SDS-PAGE上层胶预混液 | 250ml |
P0683-500ml | SDS-PAGE上层胶预混液 | 500ml |
P0686 | 6% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0688 | 8% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0690 | 10% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0692 | 12% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
P0695 | 15% SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
ST005 | Ammonium persulfate substitute (APS substitute) | 10g |
ST728 | TEMED Substitute | 10ml |