使用说明：
1. 样品的制备：
a. 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(
P0013)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用碧云天生产的RIPA裂解液(强) (
P0013B)、RIPA裂解液(中) (
P0013C)或RIPA裂解液(弱) (
P0013D)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6-8。
b. 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4ºC存放，随后即可用于click反应。新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，但如果样品不能当天使用，也可以适当分装后-80ºC冻存。
c. 如果是自行标记的Azide-tagged生物分子体系，要确保完全去除游离的叠氮化物，否则会影响DBCO磁珠与Azide-tagged生物分子的反应效率。推荐使用碧云天脱盐柱(P2603/
P2605/
P2607/
P2613/
P2615/
P2617)以去除游离的叠氮化物。
2. DBCO磁珠准备：
由于DBCO磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。
a. 用移液器轻轻吹打重悬DBCO磁珠，按照Azide-tagged生物分子的摩尔数，计算所需要的DBCO磁珠体积。取适量DBCO磁珠至一洁净离心管中(
FTUB015)，加入1X TBS (
ST661/
ST665)至最终体积为约0.5ml。注：通常DBCO磁珠的用量应略高于Azide-tagged生物分子的摩尔数量，以确保Azide-tagged生物分子完全参与反应。如果初始DBCO磁珠体积大于0.2ml，可以考虑先直接置于磁力架(
FMS012/
FMS024)上分离10秒，去除上清，然后再加入1X TBS (
ST661/
ST665)至最终体积为约0.5ml。
b. 用移液器轻轻吹打重悬DBCO磁珠。置于磁力架(
FMS012/
FMS024)上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
c. 按照初始体积的量，用1X TBS (
ST661/
ST665)重悬DBCO磁珠。
3. 点击反应:
a. 加入磁珠并孵育。准备好的DBCO磁珠与样品混合，在室温反应30-60分钟或者4ºC反应2小时，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(
E6673)。也可以使用BeyoVortex™调速式长轴旋转混匀仪(
E6826)，推荐的速度为25rpm上下翻转。
b. 磁分离。孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。
c. 洗涤。加入500μl的1X TBS (
ST661/
ST665)，用移液器轻轻吹打重悬DBCO磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复洗涤三次。洗涤完成后，Azide-tagged生物分子已经通过点击反应共价偶联到磁珠上，并可以进行下游实验。
参考文献：
1. Manuel M, Wolfgang K, Philipp D, Elke H.H, Karl M. J. Proteome Res. 2020, 19,5,2071-79.
2. John C.J, Ellen M.S, Carolyn R.B. J.Am.Chem.Soc.2010,132,11,3688-90.
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5ml |
| E6673 |
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1套 |
| E6826 |
BeyoVortex™调速式长轴旋转混匀仪 |
1套 |