使用说明：
1. 取培养过夜的酵母1.5毫升，5000g离心1分钟收集酵母沉淀，弃上清。再重复一次，每管共
　 收集3毫升培养过夜的酵母。再在离心机快速离心一下(5000g离心1-2秒)，用移液器小心吸
　 尽残余液体。
　 通常酵母宜30°C培养过夜(16-24小时左右)。建议5000g(～5000-6000rpm)室温离心1分钟，如沉淀
　 不充分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于后续加入溶液I后
　 充分重悬沉淀。直接倒掉上清，再倒入约1.5毫升酵母液并重复上述的离心操作，然后直接倒掉上清
　，再在离心机快速离心一下(5000g 1-2秒)，用移液器小心吸尽残余液体。残余液体必须吸尽，否则可
　 能会干扰后续的酶解反应。如果酵母密度明显偏低，可考虑使用更多酵母液，再重复上述操作1-2次
  　。所用酵母量一般不宜超过5ml。过量的酵母会导致后续的酶解和碱裂解不充分。
2. 每管加入100微升酶解缓冲液，重悬酵母沉淀。确保沉淀完全散开，无可见酵母团块。
　 可以通过剧烈Vortex来重悬沉淀。
3. 加入20微升配制好的Lyticase溶液，充分混匀，30℃水平摇床200-250rpm孵育0.5-1小时。
   注意：根据酵母菌株和酵母细胞数量的不同，酶解的孵育时间可进行适当调整。当酵母用量较大时
　 ，酶解的孵育时间需延长。孵育时间延长到2-3小时通常不会对质粒抽提带来负面影响。
4. 1500g (～3000-4000rpm)离心10钟，弃上清，收集沉淀。
　 直接倒掉上清，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。也可在直接倒掉上清后再在离
　 心机内甩一下，用移液器吸尽残留液体。不同离心机因离心半价的不同g和rpm的换算值有所不同。
5. 每管加入250微升溶液I，重悬酵母沉淀。确保沉淀完全散开，无可见酵母团块。
　 确认溶液I中已经添加了RNase A。由于此时酵母细胞壁已经去除，重悬操作要温和，不宜剧烈振
　 荡，否则会容易导致基因组DNA的污染。但同时必须保证沉淀充分散开，即必须确保酵母细胞充分
　 分散到溶液中。
6. 每管加入250微升溶液II，轻轻颠倒离心管4-6次，使菌体完全裂解，溶液透明。
　 切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污
　 染。遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3-5次，再室温放置2-3分钟，但总裂
　 解时间不可超过5分钟。
7. 每管加入350微升溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。
　 切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。
8. 最高速(13,000rpm左右)室温离心10分钟。
   离心后会产生白色沉淀。离心时准备好下一步需使用的质粒纯化柱，废液收集管，并在纯化柱上做
　 好标记。
9. 将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心30-60秒，倒弃收集管内
　 液体。
   质粒倒入质粒纯化柱后，可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
10. 在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV，最高速离心30-60秒，洗去杂质，倒弃收集管内液
　 体。
   加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
11. 最高速再离心1分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
   注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
12. 将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入50微升溶液V至管内柱面上，放置1分钟。
   溶液V需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液 V沾在管壁上，一定要
　 震动管子，使液体滑落到管底，以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或 MiliQ级纯水替代溶液V，
　 但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。
13. 最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度酵母质粒。