pISRE-TA-luc(报告基因质粒)

 产品编号: D2179
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D2179 pISRE-TA-luc(报告基因质粒) 1μg 862.00元

    pISRE-TA-luc(报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测ISRE转录活性水平的报告基因质粒。
pISRE-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个ISRE结合位点,可以高灵敏度地检测ISRE的激活水平。
    pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
    pISRE-TA-luc质粒的主要信息如下:
    Base pairs                                                       5671
    ISRE response element                                            26-85
    Minimal TA promoter (pTA)                                        108-130
    luc2 reporter gene                                               172-1824
    SV40 late poly(A) signal                                         1859-2080
    SV40 early enhancer/promoter                                     2128-2546
    Synthetic neomycin phosphotransferase
    (Neor) coding region                                             2571-3365
    Synthetic poly(A) signal                                         3390-3438
    Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region              3505-3524
    ColE1-derived plasmid replication origin                         3762
    Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region                    4553-5413
    Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site              5518-5671
    Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region              5620-5639
    pISRE-TA-luc质粒的图谱如下:
             
    pISRE-TA-luc的多克隆位点及ISRE response element的详细图谱如下:
         BglI         KpnI  NheI     ISRE response element
    1   GGCCTAACTG GCCGGTACCG CTAGCGAAAC TGAAACTGAA ACTGAAACTG
        CCGGATTGAC CGGCCATGGC GATCGCTTTG ACTTTGACTT TGACTTTGAC
                                              BglII      HindIII
    51  AAACTGAAAC TGAAACTGAA ACTGAAACTG AAACTAGATC TGCAGAAGCT
        TTTGACTTTG ACTTTGACTT TGACTTTGAC TTTGATCTAG ACGTCTTCGA
               Minimal TA promoter
    101 TAGACACTAG AGGGTATA
        ATCTGTGATC TCCCATAT
    pISRE-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pISRE-TA-luc)包括:
    Aat II   Afl II   Asc I   Ase I      Bsa I   BsaA I   BsiW I   BspM II
    BssH II  Eco72 I  EcoR I  EcoR V     Mlu I   Nde I    Nru I    PaeR7 I
    PflM I   Pme I    Pml I   Psp1406 I  PspA I  Rsr II   Sac I    Sma I
    SnaB I   Spl I    Srf I   Tth111 I   Vsp I   Xcm I    Xho I
    pISRE-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pISRE-TA-luc once)包括:

Sfi I    GGCCN,NNN`NGGCC    9
Bgl I    GCCN,NNN`NGGC      9
Acc65 I  G`GTAC,C           15
Asp718   G`GTAC,C           15
Kpn I    G,GTAC`C           19
Nhe I    G`CTAG,C           21
Bgl II   A`GATC,T           87
Hind III A`AGCT,T           97
BsrG I   T`GTAC,A           663
Dra III  CAC,NNN`GTG        1319
Gsu I    CTGGAG 21/19       1552
Bpm I    CTGGAG 22/20       1553
Apo I    R`AATT,Y           1935
Mun I    C`AATT,G           1999
BamH I   G`GATC,C           2092
Stu I    AGG|CCT            2525
EcoN I   CCTNN`N,NNAGG      3046
BsiC I   TT`CG,AA           3441

BstB I      TT`CG,AA             3441
Sal I       G`TCGA,C             3455
Afl III     A`CRYG,T             3705
ApaL I      G`TGCA,C             4019
HgiE II     ACCNNNNNNGGT    -1/134284
Not I       GC`GGCC,GC           4525
BstX I      CCAN,NNNN`NTGG       4549
BstE II     G`GTNAC,C            4552
Ahd I       GACNN,N`NNGTC        4627
Bsu36 I     CC`TNA,GG            4983
Pvu I       CG,AT`CG             4997
Sac II      CC,GC`GG             5021
Bst1107 I   GTA|TAC              5137
Xca I       GTA|TAC              5137
Spe I       A`CTAG,T             5456
BsmA I      GTCTC`/9             5468
BsmB I      CGTCTC 7/11          5469

    pISRE-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
    RVprimer3 (5620-5639):
    CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
    pISRE-TA-luc的全序列信息:D2179 pISRE-TA-luc-seq.txt
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D2179

pISRE-TA-luc(报告基因质粒)

1μg

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保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pISRE-TA-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用碧云天的萤火虫萤光素酶报告基因检
   测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
3. 可以激活ISRE的试剂,可以用作pISRE-TA-luc报告基因检测时的阳性对照。

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   with LvTolls.

   Dev Comp Immunol. 2014 Mar;43(1):15-22. doi: 10.1016/j.dci.2013.10.005.
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   Arch Virol. 2014 Nov;159(11):2937-48. doi: 10.1007/s00705-014-2148-6. Epub 2014 Jun 17.



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