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pCMV-N-Flag

 产品编号: D2722
 产品包装: 1μg
 产品价格: 862.00元
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产品简介

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2722 pCMV-N-Flag 1μg 862.00元

    pCMV-N-Flag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的
蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
    pCMV-N-Flag质粒的主要信息如下:
    Feature Nucleotide                                 Position
    CMV promoter                                       1-602
    T3 promoter and T3 primer binding site             620-639
    Flag tag                                           679-702
    multiple cloning site                              705-778
    T7 promoter and T7 primer binding site             821-842
    SV40 polyA signal                                  854-1237
    f1 origin of ss-DNA replication                    1375-1681
    bla promoter                                       1706-1830
    SV40 promoter                                      1850-2188
    neomycin/kanamycin resistance ORF                  2223-3014
    HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal               3015-3473
    pUC origin                                         3602-4269
    pCMV-N-Flag质粒的图谱如下:
       
    pCMV-N-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
                                              Flag tag        
        SacI                       M  D   Y  K  D   D  D  D  K
    651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGGA TTACAAGGAT GACGACGATA
        CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACCT AATGTTCCTA CTGCTGCTAT
            XmaI                 PstI
            SmaI    BamHI HindIII      EcoRI  EcoRV SalI   BglII
    701 AGAGCCCGGG CGGATCCAAG CTTCTGCAGG AATTCGATAT CGTCGACAGA
        TCTCGGGCCC GCCTAGGTTC GAAGACGTCC TTAAGCTATA GCAGCTGTCT
           XhoI  XbaI          ApaI
    751 TCTCTCGAGT CTAGAACTAG TGGGCCCGGT ACCTTAATTA ATTAAGGTAC
        AGAGAGCTCA GATCTTGATC ACCCGGGCCA TGGAATTAAT TAATTCCATG
    pCMV-N-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag)包括:
    Afl II    Age I    Ahd I       Asc I     Bbs I    Bbv II      Blp I
    Bsg I     BsiW I   BsmB I      BspM II   BsrG I   BssH II     Bst1107 I
    BstE II   Ear I    Eco47 III   Eco72 I   EcoN I   Esp I       Fse I
    Nru I     PflM I   Pme I       Pml I     PpuM I   Psp1406 I   Sap I
    Sca I     Spl I
    pCMV-N-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag once)包括:

Nde I      CA`TA,TG       241
SnaB I     TAC|GTA        347
Nhe I      G`CTAG,C       598
Sac I      G,AGCT`C       656
Sac II     CC,GC`GG       663
BstX I     CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I      GC`GGCC,GC     669
PspA I     C`CCGG,G       706
Xma I      C`CCGG,G       706
Srf I      GCCC|GGGC      708
Sma I      CCC|GGG        708
BamH I     G`GATC,C       713
Hind III   A`AGCT,T       719
Pst I      C,TGCA`G       729
EcoR I     G`AATT,C       731
EcoR V     GAT|ATC        739
Sal I      G`TCGA,C       743
Acc I      GT`MK,AC       744
Bgl II     A`GATC,T       749
PaeR7 I    C`TCGA,G       755
Xho I      C`TCGA,G       755
Xba I      T`CTAG,A       761
Spe I      A`CTAG,T       767
Bsp120 I   G`GGCC,C       773
Apa I      G,GGCC`C       777

Pvu I       CG,AT`CG           855
Bcl I       T`GATC,A          1009
Mun I       C`AATT,G          1102
Hpa I       GTT|AAC           1115
Mlu I       A`CGCG,T          1238
Dra III     CAC,NNN`GTG       1468
Sfi I       GGCCN,NNN`NGGCC   2127
BseR I      GAGGAG 16/14      2170
Stu I       AGG|CCT           2173
Cla I       AT`CG,AT          2192
Kas I       G`GCGC,C          2351
Nar I       GG`CG,CC          2352
Ehe I       GGC|GCC           2353
Bbe I       G,GCGC`C          2355
Msc I       TGG|CCA           2434
Tth111 I    GACN`N,NGTC       2470
BsrD I      GCAATG, 8         2585
Bsp1286 I   G,DGCH`C          2655
Rsr II      CG`GWC,CG         2868
BsiC I      TT`CG,AA          3034
BstB I      TT`CG,AA          3034
Bsa I       GGTCTC 7/11       3341
HgiE II     ACCNNNNNNGGT-1/13 3681
ApaL I      G`TGCA,C          3956

    pCMV-N-Flag质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
    T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
    T7 primer(821-842): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
    pCMV-N-Flag的全序列信息: D2722 pCMV-N-Flag-seq.txt
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D2722

pCMV-N-Flag

1μg

说明书

1份

保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-Flag质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之
   间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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1. Zhu H, Zheng C, Xing J, Wang S, Li S, Lin R, Mossman KL.
   Varicella-zoster virus immediate-early protein ORF61 abrogates the IRF3-mediated innate
   immuneresponse through degradation of activated IRF3.

   J Virol. 2011 Nov;85(21):11079-89.
2. Wang L, Li M, Cai M, Xing J, Wang S, Zheng C.
   A PY-nuclear localization signal is required for nuclear accumulation of HCMV UL79 protein.
   Med Microbiol Immunol. 2012 Aug;201(3):381-7. doi: 10.1007/s00430-012-0243-4.
   Epub 2012 May 25.
3. Liao Z, Chen X, Nie D, Wang J, Wu M.
   A RING finger protein 114 (RNF114) homolog from Chinese sturgeon (Acipenser sinensis)
   possesses immune-regulation properties via modulating RIG-I signaling pathway-mediated
   interferon expression.

   Fish Shellfish Immunol. 2014 Oct 5. pii: S1050-4648(14)00365-9. doi: 10.1016/
   j.fsi.2014.09.030.
4. Yang Q, Ou C, Liu M, Xiao W, Wen C, Sun F.
   NRAGE promotes cell proliferation by stabilizing PCNA in a ubiquitin-proteasome pathway in
   esophageal carcinomas.

   Carcinogenesis. 2014 Jul;35(7):1643-51. doi: 10.1093/carcin/bgu084. Epub 2014 Apr 7.



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