EcoRI内切酶

产品简介

产品简介：

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D6329	EcoRI	2000U	72.00元

EcoRI内切酶为进口分装，基本信息如下：

识别序列	缓冲液兼容性(%)							酶切温度	失活条件	甲基化干扰？
G^AATTC CTTAA^G	1X EcoRI	1X B	1X G	1X O	1X R	1X Y	2X Y	37℃	65℃ 20min	有时有干扰
G^AATTC CTTAA^G	100	0-20	NR	100	100*	NR	100	37℃	65℃ 20min	有时有干扰

    *，Star activity，当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性，即产生非特异性酶活性。
    NR，不推荐使用这种缓冲液，因为会产生很高的星号活性。
    根据识别序列邻近序列的不同，酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
    酶储存液组成为：10mM potassium phosphate(pH7.4 at 25℃)，300mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.2mg/ml BSA，0.15% Triton X-100 and 50% glycerol。
    1X Buffer EcoRI组成为：50mM Tris-HCl(pH7.5 at 37℃)，10mM MgCl₂，100mM NaCl，0.02% Triton X-100，0.1mg/ml BSA。
    1X Buffer Y组成为：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassium acetate，0.1mg/ml BSA。
    酶切和连接效率：50倍过量的本内切酶消化1小时，>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
    活性单位定义：在37℃，50微升反应体系中反应1小时，将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位，即1U。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D6329-1	EcoRI(10U/μl)	2000U
D6329-2	10X Buffer EcoRI	0.3ml
D6010Y	10X Buffer Y	1ml
－	说明书	1份

保存条件：
    -20℃保存。
注意事项：
    内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
    如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认是否存在甲基化干扰问题。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明：
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行：

待酶切DNA	不超过1μg
双蒸水或MilliQ水	适量
10X Buffer EcoRI	2μl
EcoRI	0.5-1μl
总体积	20μl
37℃孵育1小时或更长时间

    说明：请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶，加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混
    匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够，但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果
    酶切较长时间甚至酶切过夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时，可以适当延长酶切时间或按
    比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时，需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液，然后参考上表设置反应体系。
   如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切
   反应。

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