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核酸相关> 菌种与质粒> 原核载体
pET-Dual-N-GST
产品编号: D2931-1μg
产品包装:1μg
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价格: ¥ 888.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2931-1μg pET-Dual-N-GST 1μg 888.00元
D2931-100μg pET-Dual-N-GST 100μg 1169.00元

      pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
      在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP),宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物,配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
T7 transcription start-1 1
GST-taq coding sequence 71-727
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) 730-780
T7 promoter-2 838-854
T7 transcription start-2 855
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) 922-983
S Tag coding sequence 990-1034
T7 terminator 1086-1133
f1 origin 1171-1618
bla(Ap) coding sequence 1743-2600
pBR322 origin 3361
lacI coding sequence 4555-5637
T7 promoter-1 6028-6044

      pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下:

pET-Dual-N-GST质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2931 pET-Dual-N-GST.pdf

      pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括:

AgeI AleI BbvCI BmgBI BmtI BseRI BsiWI
BsmI Bsu36I CspCI NheI NruI NsiI PmeI
PmlI PspAI RsrII SacII SexAI SfiI SmaI
SnaBI SpeI SrfI StuI TspMI XmaI

      pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括:

XbaI T`CTAG,A 30 AvaI C`YCGR,G 978
NcoI C`CATG,G 69 PaeR7I C`TCGA,G 978
MscI TGG|CCA 281 XhoI C`TCGA,G 978
BstBI TT`CG,AA 471 AvrII C`CTAG,G 1057
SwaI ATTT|AAAT 501 BlpI GC`TNA,GC 1075
BamHI G`GATC,C 730 DraIII CAC,NNN`GTG 1404
EcoRI G`AATT,C 736 PsiI TTA|TAA 1528
Eco53kI GAG|CTC 744 SspI AAT|ATT 1608
SacI G,AGCT`C 742 AhdI GACNN,N`NNGTC 1812
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 748 BsaI GGTCTCN`NNNN, 1874
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 748 BglI GCCN,NNN`NGGC 1930
AscI GG`CGCG,CC 749 FspI TGC|GCA 2035
PstI C,TGCA`G 755 AlwNI CAG,NNN`CTG 3006
SalI G`TCGA,C 761 BstZ17I GTA|TAC 3651
HindIII A`AGCT,T 767 Tth111I GACN`N,NGTC 3676
NotI GC`GGCC,GC 774 PflFI GACN`N,NGTC 3676
AflII C`TTAA,G 787 Bpu10I CC`TNA,GC 4313
BsrGI T`GTAC,A 814 PpuMI RG`GWC,CY 4413
NdeI CA`TA,TG 922 HpaI GTT|AAC 4780
BglII A`GATC,T 929 PspoMI G`GGCC,C 5075
MunI C`AATT,G 935 ApaI G,GGCC`C 5075
EcoRV GAT|ATC 943 BstEII G`GTNAC,C 5100
FseI GG,CCGG`CC 948 MluI A`CGCG,T 5282
AsiSI GCG,AT`CGC 959 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 5603
ZraI GAC|GTC 968 SphI G,CATG`C 5811
AatII G,ACGT`C 966 SgrAI CR`CCGG,YG 5963
Acc65I G`GTAC,C 972 BspDI AT`CG,AT 6007
KpnI G,GTAC`C 972 ClaI AT`CG,AT 6007
PspXI VC`TCGA,GB 978

      pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
      MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      pET-Dual-N-GST的全序列信息:D2931 pET-Dual-N-GST.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2931-1μg pET-Dual-N-GST 1μg
D2931-100μg pET-Dual-N-GST 100μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pET-Dual-N-GST质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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