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 TEV Protease

  产品编号P2307
  产品包装: 1000U
  产品价格: 186.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2307 TEV Protease 1000U 186.00元

      TEV Protease是一种在大抽杆菌中重组表达的带His标签(6X His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶,能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser,并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切,常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。
      建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端,并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GST或His标签被酶切后,在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基,从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒,可以考虑选购碧云天的质粒pET-N-His-TEV (P2905)。
      TEV Protease的最佳的酶切温度是30℃,但在4-30℃和pH6.0-8.5范围内皆有活性。因此在实际操作过程中,为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性,建议在4℃酶切过夜。
      TEV Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力,因此对于很多用鎳柱纯化的His标签目的蛋白,可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中,在4℃边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白,溶液中带有His标签的本TEV Protease以及切除下来的His标签,都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin 
(P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)。
      酶活性单位定义:30℃,pH8.0条件下反应1小时,能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。
      碧云天TEV Protease酶活性鉴定结果可参考图1。

      
         图1.TEV Protease切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Protease进行反应,
         底物的用量为3μg,酶的用量依次为0、0.1、0.25、0.5、0.67、1、2U,30°C在1X TEV Buffer中反应1小时后取样进行
         SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。

      TEV Protease分子量大小约28kDa,纯度:≥95%。
      TEV Protease储存液组成为:25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0。
      10X TEV Buffer组成为:500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0。
      本产品一个包装含有1000单位的酶,可用于约3mg带有TEV Protease识别位点的融合蛋白的切割。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2307-1 TEV Protease (1U/µl) 1ml
P2307-2 10X TEV Buffer 2ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.由于不同标签蛋白具有不同的特性,所以在实际使用时,建议对酶和标签蛋白的比例进行适当优化,以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。
a.按照下表设置酶切反应体系:
组分 体积(μl)
H2O X
10X TEV Buffer 5
标签蛋白(8μg) Y
TEV Protease (1U/μl) 0、1.5或2.5
总体积 50
注:如果标签蛋白浓度为2μg/μl,那么Y=8/2=4,即须使用4μl 2μg/μl的标签蛋白。
b.将反应混合物放置于4°C反应16小时或30°C反应1小时。
c.取20μl样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中,如果有必要,还可以在反应的不同时间点取少量样品,后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。

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产品编号 产品名称 包装
P2210 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 10ml
P2218 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 100ml
P2220 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 1000ml
P2226 His标签蛋白纯化试剂盒 10ml
P2251 BeyoGold™ GST-tag Purification Resin 10ml
P2253 BeyoGold™ GST-tag Purification Resin 100ml
P2255 BeyoGold™ GST-tag Purification Resin 1000ml
P2262 GST标签蛋白纯化试剂盒 10ml
P2302 PreScission Protease 100U
P2303 PreScission Protease 500U
P2307 TEV Protease 1000U
P2308 TEV Protease 10000U
D2905 pET-N-His-TEV 1μg


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