MTT、CCK8、EdU…那么多细胞增殖检测方法怎么选？！

细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等一系列反应以细胞分裂的方式进行数量增加的过程，是生命体的重要生命特征。市场上检测细胞增殖的产品五花八门，很容易让大家眼花缭乱~今天小编给大家来讲解下目前用来检测细胞增殖的几个主要方法吧，以期让大家在选择产品时做到心中有数、镇定自若~再也不怕被argue啦！

MTT法-入门级检测法

MTT即噻唑蓝，是一种可接受氢离子的黄色有机化合物,可以被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶和细胞色素C等还原为不能溶于水的蓝紫色产物甲臜（formazan）。该产物虽然不溶于水，但可以溶于特定溶剂(如DMSO)，在特定溶剂存在的情况下，该产物被完全溶解，然后通过酶标仪在特定波长（如570nm）条件下根据吸光度来反应细胞增殖/毒性情况。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

图1.MTT原理图。

碧云天MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒采用了独特的Formazan 溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

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CCK-8法-MTT升级，细胞毒性小

CCK-8法，也有人称该法是MTT法升级版。使用的是WST-8(一种类似于MTT的化合物)，它在电子耦合试剂的作用下可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原为高度水溶性的黄色甲臜（Formazan）, 细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图2. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)

CCK-8法所使用的WST-8检测细胞增殖、细胞毒性的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS高，并且对细胞几乎没有毒性, 因此，检测完成后的细胞还可以继续培养使用。碧云天新近推出了仅需0.5-1h即可完成检测的Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒)可以免费领取试用装哦~此外，最近碧云天也推出了适用于3D细胞培养检测的Cell Counting Kit-3D (CCK-3D试剂盒)。

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化学发光法—更快速、更方便

以碧云天CellTiter-Lumi™系列产品为例，该方法是通过检测ATP来反映细胞活力的。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应，ATP可以通过测定化学发光来进行定量。由于ATP含量能很好地反映活细胞的数目，而ATP含量和发光强度成正比，这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出细胞活力或细胞数目。

图3. 碧云天CellTiter-Lumi™ II发光法细胞活力检测试剂盒(CTL II)检测ATP的原理图。

该方法完成检测仅需约10分钟，检测速度更快！且适用于细胞数量较多的实验。

CellTiter-Lumi™系列各个产品的对比见下表：

同时，我们还推出了2.0冻干粉版本的产品——CellTiter-Lumi™ II发光法细胞活力检测试剂盒系列产品，与CTL系列相比，二者检测效果完全一致，唯一不同的是II代产品为冻干粉版本，在-20℃保存特别稳定！

CellTiter-Lumi™ II系列各个产品的对比见下表：

同样地，碧云天新近也上架了适用于3D细胞检测的CellTiter-Lumi™发光法3D细胞活力检测试剂盒哦：

CFDA SE法-标记单个细胞，需流式检测

CFDA-SE是一种可以通透细胞膜的新型荧光探针。进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地、不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。

图4.随着细胞代数增加，荧光强度越弱。

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EdU法-基于DNA合成，结果更真实可靠

EdU是一种新型胸腺嘧啶核苷类似物，可以在DNA合成过程中替代胸腺嘧啶掺入到新合成的DNA中。此外，EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Click reaction)，通过点击反应，新合成的DNA会被相应的荧光探针标记，从而可以通过DNA的合成来反应细胞的增殖情况。

图4. BeyoClick™ EdU检测法中的点击反应(Click reaction)原理图。

MTT法、WST-1法、CCK-8法和CellTiter-Lumi™化学发光法都是基于细胞活性的细胞增殖检测方法，能检测到细胞的总体增殖效果，但无法检测到单个的增殖细胞。这几种方法尽管都不是检测DNA合成的，但被广泛用于替代[3H]thymidine掺入法。CFDA SE法基于细胞荧光示踪的原理能检测到单个的增殖细胞，但由于每增殖一次荧光减弱一半，在荧光显微镜下较难区分荧光减弱一半的细胞，检测灵敏度不是很高，通常仅适用于流式细胞仪检测。在进行科学研究时，上述这些基于细胞活性或CFDA SE的方法可以作为EdU法的补充性检测方法。

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客户案例

2023年1月19日，上海科技大学黄行许研究团队在Nature Communications（IF:17.694） 杂志上发表题为Development of a versatile nuclease prime editor with upgraded precision的研究成果，该团队开发出了一种更高精度的多功能核酸酶先导编辑器。
      特别地，该研究使用碧云天CellTiter-Lumi™ Plus II发光法细胞活力检测试剂盒（C0057）孵育10分钟，轻松完成了细胞活力检测~

2023年1月17日，复旦大学肿瘤医院孔琳课题组在Nature Communications（IF:17.694） 杂志上发表题为Tumor-intrinsic YTHDF1 drives immune evasion and resistance to immune checkpoint inhibitors via promoting MHC-I degradation的研究成果，该团队阐明了肿瘤内源性YTHDF1在驱动免疫逃避中的作用及其潜在机制。
      特别地，该研究使用了碧云天BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒（C0078）。