His标签纯化原理
His标签已被广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、相互作用和功能等多方面的研究。His-tag蛋白纯化琼脂糖磁珠是在琼脂糖微球的内部填充磁性内核，在表面固定金属离子Ni2+或Co2+，Ni2+或Co2+可以和蛋白His标签中组氨酸形成配位键，将目标蛋白结合到磁珠上，最后通过磁性分离器分离出来。Ni2+在亲和纯化实验中的使用最为广泛。根据结合基团的不同，Ni2+琼脂糖磁珠可分为IDA-Ni、NTA-Ni和TED-Ni。其中，IDA与His标签蛋白结合力相对最强，载量最高，但特异性较弱，可用低浓度的咪唑进行高效洗脱，而TED则相反。NTA与His标签蛋白的作用介于两者之间。
His-Tag蛋白纯化优势：
1.His-tag分子量非常小，几乎不会影响目的蛋白的功能，对蛋白的下游应用没有影响；
2.His-tag作为标签蛋白，后续通过His标签抗体对目的基因的表达、定位及功能进行检测，也可以通过His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠或常规的His标签蛋白纯化介质对目的蛋白进行纯化；
3.采用IMAC（固定化金属离子亲和层析）纯化His-Tag融合蛋白，蛋白纯化步骤简便，且蛋白纯化完之后不切除His标签，很多情况下也不会对蛋白的功能产生影响；
4.与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统；
5.N-端的His-tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达。
继BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(IDA-Ni)（P2239）之后，碧云天最新推出His-tag Ni2+琼脂糖磁珠系列BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(NTA-Ni/TED-Ni) (P2241/P2243)以及提供配套试剂，非变性和变性条件都可以使用的His标签蛋白纯化试剂盒(IDA-Ni/NTA-Ni/TED-Ni琼脂糖磁珠) (P2245S/P2247S/P2249S)。小编为大家总结了几种His-tag Ni2+琼脂糖磁珠的区别，大家可以根据实验需求进行选购。
| 产品货号 | Ni2+琼脂糖磁珠 | His标签蛋白载量/ml | 标签蛋白结合能力 | 特异性 |
| P2239/P2245S | IDA-Ni | 20-40mg | 最强 | 较弱 |
| P2241/P2247S | NTA-Ni | >20mg | 居中 | 居中 |
| P2243/P2249S | TED-Ni | >10mg | 较弱 | 最强 |
产品信息：
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
| P2241-2ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(NTA-Ni) | 2ml |
| P2241-10ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(NTA-Ni) | 10ml |
| P2241-50ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(NTA-Ni) | 50ml |
| P2243-2ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(TED-Ni) | 2ml |
| P2243-10ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(TED-Ni) | 10ml |
| P2243-50ml | BeyoMag™ His标签蛋白纯化琼脂糖磁珠(TED-Ni) | 50ml |
| P2245S | His标签蛋白纯化试剂盒(TED-Ni琼脂糖磁珠) | 10ml |
| P2247S | His标签蛋白纯化试剂盒(NTA-Ni琼脂糖磁珠) | 10ml |
| P2249S | His标签蛋白纯化试剂盒(TED-Ni琼脂糖磁珠) | 10ml |
工作原理
图1.碧云天His标签蛋白纯化试剂盒(IDA-Ni/NTA-Ni/TED-Ni琼脂糖磁珠)工作原理与操作流程图。
产品特点
稳定性高、特异性强、靶蛋白结合量高：与国内外大多数的同类产品相比，镍离子配基密度高，几乎不会脱落，对带有His标签蛋白的结合具有很强的特异性。本产品每毫升悬浊液含约25%琼脂糖磁珠沉淀，具体的最大结合量和标签蛋白的分子量大小等相关；
可结合多种形式的His标签蛋白：本产品可特异性地结合N端His融合蛋白(His-Protein)、C端His融合蛋白(Protein-His)；
结合目的蛋白速度快：使用了IDA/NTA/TED螯合的镍离子，粒径都在100μm左右。通常30分钟内即可完成His蛋白吸附的过程，60分钟内完成目的蛋白纯化或免疫沉淀操作；
可高效洗脱His标签蛋白：本产品根据目的蛋白的结构、生物学功能及后续应用的要求等，使用咪唑(Imidazole)进行多次洗脱。洗脱时间短，洗脱效率高。
使用便捷：琼脂糖磁珠储存在特殊保护液中，不含甘油，可以通过磁性吸附实现快速高效的分离，无需离心操作。
除了这些优点，我们的His-tag琼脂糖磁珠试剂盒还有更多的实用之处哦~
试剂盒使用便捷，提供了配套试剂：琼脂糖磁珠试剂盒提供了His标签蛋白纯化所需的相关试剂，为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利；
试剂盒用途广泛，非变性和变性条件都可以使用：琼脂糖磁珠试剂盒提供了非变性和变性条件下纯化His标签蛋白所需的不同的裂解液、洗涤液和洗脱液，可以很好地满足不同实验的需要；
变性条件溶解性好，洗脱样品可以直接PAGE检测：试剂盒配套提供的变性裂解液、变性洗脱液和变性洗涤液中均含有8M尿素，可以有效促使蛋白变性和溶解；最终洗脱下来的目的蛋白无需透析即可用于PAGE检测。最终纯化获得的目的蛋白可以通过透析去除尿素后用于后续特定用途。
产品效果
图2.碧云天His标签蛋白纯化试剂盒(IDA-Ni琼脂糖磁珠)(P2245)在非变性条件下用于His标签融合蛋白的纯化效果图。
图3.碧云天His标签蛋白纯化试剂盒(NTA-Ni琼脂糖磁珠) (P2247)在非变性条件下用于His标签融合蛋白的纯化效果图。
图4.碧云天His标签蛋白纯化试剂盒(TED-Ni琼脂糖磁珠) (P2249)在非变性条件下用于His标签融合蛋白的纯化效果图。
相关信息