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细胞相关> 基因表达调控> 细胞转染
Lipo293F™ Plus转染试剂
产品编号: C0519-10ml
产品包装:10ml
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价格: ¥ 2678.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0519-1ml Lipo293F™ Plus转染试剂 1ml 408.00元
C0519-10ml Lipo293F™ Plus转染试剂 10ml 2678.00元
C0519-100ml Lipo293F™ Plus转染试剂 100ml 16928.00元

碧云天生产的Lipo293F™ Plus转染试剂(Lipo293F™ Plus Transfection Reagent)是一种非常高效的基于改良的阳离子脂质体的新型转染试剂,专门适用于悬浮培养的HEK293细胞,如Freestyle™ 293-F等,进行质粒转染和重组蛋白大量表达。本产品与Thermo公司的293fectin™ Transfection Reagent和Merck公司的293-Free™ Transfection Reagent的用途和使用效果基本一致或更佳,与Thermo公司的FreeStyle™ MAX Reagent相比,用于悬浮培养的293细胞时效果基本一致或略佳。

Lipo293F™ Plus转染试剂对Expi293F™或Freestyle™ 293-F细胞的转染效率非常高(约90%),同时具有细胞毒性极低、重复性好、操作简单、转染后无需更换培养液等突出优点。悬浮培养293系列细胞转染试剂的比较和选择请参考:http://www.beyotime.com/support/lipo293F.htm

Lipo293F™ Plus转染试剂也同样适用于293系列贴壁细胞的转染,但转染293系列贴壁细胞时,推荐使用性价比更高的Lipo293™ Plus转染试剂(C0522)或Lipo293™转染试剂(C0521)。

Lipo293F™ Plus转染试剂兼容性好,细胞转染可允许血清和抗生素存在的情况下进行,无需Opti-MEM®或无血清培养液。

Lipo293F™ Plus转染试剂转染细胞目的蛋白表达质粒后,通常在48-72小时后达到比较理想的蛋白表达水平。

Lipo293F™ Plus转染试剂的转染效率可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

Lipo293F™ Plus转染试剂为化学合成,因此不含动物源成分(Animal origin-free, AOF)。

Lipo293F™ Plus转染试剂转染Expi293F™细胞效果请参考图1。

图1.碧云天Lipo293F™ Plus转染试剂(C0519)转染Expi293F™细胞的效果图。如图所示,Lipo293F™ Plus转染试剂与同类转染试剂(Competitor)转染表达EGFP的质粒至Expi293F™细胞,转染48小时后,Expi293F™细胞的荧光照片。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

按照DNA用量(μg)和Lipo293F™ Plus转染试剂(μl)的比例为1:2使用,每毫升Lipo293F™ Plus转染试剂可以转染500μg质粒。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C0519-1ml Lipo293F™ Plus转染试剂 1ml
C0519-10ml Lipo293F™ Plus转染试剂 10ml
C0519-100ml Lipo293F™ Plus转染试剂 100ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,两年有效。长期不使用可以-20ºC保存。

注意事项:

使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提,以保证可以获得较高的转染效率。

转染前细胞必须处于良好的生长状态。

虽然本转染试剂可允许血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染,但使用无血清或低浓度血清(如5%或以下)、无抗生素的培养液或Opti-MEM®,转染效率可能会更好。

Lipo293F™转染试剂不能vortex或离心,可以用移液器轻轻吹打混匀或缓慢摇动混匀。

本转染试剂使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
本使用说明以转染10ml Expi293F™细胞为例。
1.接种细胞:
转染前一天(18-24小时)根据细胞状态,接种合适的细胞密度(例如100万-150万cells/ml), 使第二天转染时细胞密度达到200万-300万cells/ml。
2.准备DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物:
a.DNA稀释液的配制:对于待转染的10ml Expi293F™细胞,取一个洁净无菌离心管,加入500μl细胞培养液和10μg DNA,并用移液器轻轻吹打混匀。
注:使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释,可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
b.Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液的配制:对于待转染的10ml Expi293F™细胞,取一个洁净无菌离心管,加入450-490μl细胞培养液和10-50μl Lipo293F™ Plus转染试剂,并用移液器轻轻吹打混匀。
注1:细胞培养液和Lipo293F™ Plus转染试剂总体积为500μl。
注2:使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释,可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
c.DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物的配制:将配制好的Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中,轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后,室温孵育10-20分钟。
注1:推荐DNA用量(μg)和Lipo293F™ Plus转染试剂(μl)的比例为1:2,可在1:1-1:5之间进行调整(甚至可以类似1:1.5或1:2.5的比例进行调整),因不同的细胞类型和培养条件而有所不同,可以在上述推荐范围内自行优化,摸索最佳的转染条件。
注2:建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序,效果更佳。
d.对于不同体积的细胞培养液,DNA与Lipo293™ Plus转染试剂用量请参考下表,最佳的转染效果须自行适当优化。
转染体系体积 10ml 20ml 50ml 100ml 200ml 500ml
细胞培养液 0.5ml 1ml 2.5ml 5ml 10ml 25ml
DNA 10μg 20μg 50μg 100μg 200μg 500μg
细胞培养液 0.5ml 1ml 2.5ml 5ml 10ml 25ml
Lipo293F™ Plus转染试剂 20μl 40μl 100μl 200μl 400μl 1ml
将配制好的Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中,室温孵10-20分钟
随后加入到培养的悬浮细胞中继续培养24-96小时,后续进行目的蛋白的检测和纯化。
3.转染细胞:
a.将1ml DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物均匀滴加到10ml Expi293F™细胞中。
b.在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下,继续培养24-96小时后,即可用适当方式检测转染效果,例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等,或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选[1]。
附录:
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表:
Multiple Well Plates or Dishes Single Well Only for Plates
Diameter (Bottom, mm)* Growth Area (cm2)* Average Cell Yield Total Well Volume (ml) Working Volume (ml) Recommended Volume (ml)
6 well 34.8 9.5 9.5 × 105 16.8 1.9-2.9 2
12 well 22.1 3.8 3.8 × 105 6.9 0.76-1.14 1
24 well 15.6 1.9 1.9 × 105 3.4 0.38-0.57 0.5
48 well 11.0 0.95 9.5 × 104 1.6 0.19-0.285 0.25
96 well 6.4 0.32 3.2 × 104 0.36 0.10-0.20 0.1
384 well 2.7 0.056 5.6 × 103 0.112 0.025-0.050 0.030
1536 well 1.63 × 1.63** 0.025 2.5 × 103 0.0125 0.005-0.010 0.010
3.5cm dish 34 9 9.0 × 105 NA 1.8-2.7 2
6cm dish 52 21 2.1 × 106 NA 4.2-6.3 5
10cm dish 8.4 55 5.5 × 106 NA 11-16.5 12
15cm dish 14 152 1.5 × 107 NA 30.4-45.6 35
24.5cm dish 22.4 × 22.4** 500 5.0 × 107 NA 100-150 120
*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
参考文献:
1.Hasebe A, Tashima H, Ide T, Iijima M, Yoshimoto N, et al. Mol Biotechnol. 2012. 51(1):58-66.
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