产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D0412 | 毕赤酵母GS115甘油菌 | 200μl | 218.00元 |
碧云天生产的毕赤酵母GS115甘油菌(Pichia Pastoris GS115 Yeast Glycerol Stock)是取对数生长期的毕赤酵母GS115菌液,加入等体积30% (v/v)甘油制备而成。本甘油菌可以直接平板划线或小量、大量培养。
毕赤酵母具有真核细胞表达系统多方面的优势,包括较好的蛋白翻译后剪切、蛋白折叠以及翻译后修饰等[1]。与昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统相比,毕赤酵母表达系统快速、高效且经济,通常外源蛋白还具有较高的表达水平。与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)相比,毕赤酵母的外源蛋白表达水平往往高10-100倍,并且能进行分泌蛋白的N-连接糖苷键修饰。但表达分泌蛋白进行糖基化修饰时的糖链长度是有差别的,毕赤酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是8-14个甘露糖残基(Mannose residue),而酿酒酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是50-150个甘露糖残基,此外,毕赤酵母很少对分泌蛋白进行O-连接糖苷键的修饰[2]。
毕赤酵母表达系统中高水平重组蛋白表达的宿主是甲基营养型(即甲醇利用正常型)毕赤酵母(Methylotrophic yeast Pichia Pastoris )。在没有葡萄糖的情况下,毕赤酵母使用甲醇作为碳源。乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX1)启动子控制乙醇氧化酶的表达,是催化甲醇代谢的第一步。通常,甲醇诱导的细胞中总可溶性蛋白质的30%是乙醇氧化酶[3]。一些毕赤酵母表达载体利用强大的AOX1启动子,并使用甲醇诱导目的基因的高水平表达。如果更倾向于不依赖于甲醇诱导的表达,可以使用GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)基因的启动子实现组成型表达。诱导型和组成型表达构建物均整合到毕赤酵母基因组中,形成稳定的宿主,产生极高的蛋白质表达水平。AOX1基因突变丧失功能时,乙醇氧化酶活性缺失,产生Methanol utilization slow (Muts)基因型,也称Methanol utilization minus (Mut-)基因型,而AOX1基因表达正常则被称为Methanol utilization plus (Mut+)基因型[4]。毕赤酵母GS115为Mut+基因型。
毕赤酵母GS115的组氨醇脱氢酶基因(Histidinol dehydrogenase, his4 )发生突变,阻止其合成组氨酸,所以GS115属于组氨酸缺陷型菌株(His-);如果表达载体上携带有组氨醇脱氢酶基因,就可补偿宿主菌的组氨酸缺陷,因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子,适用于筛选带有his4基因的表达载体。
毕赤酵母GS115基因型:Aox1+, his4-,即Mut+, his4-,即为Methanol utilization plus and histidinol dehydrogenase mutation。
本甘油菌适宜的生长温度是28-30℃,温度超过32℃不利于蛋白的表达,并可能导致细胞死亡。
本甘油菌可以在复合培养基如YPD中生长,或者在补充有组氨酸的基础培养基中生长。
关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择,可参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/support/strain.htm
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D0412 | 毕赤酵母GS115甘油菌 | 200μl | — | 说明书 | 1份 |
-80℃保存,至少2年有效。须注意避免反复冻融。
注意事项:使用本甘油菌时可以不必完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加酵母菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下,菌体会逐渐沉淀至管底,请务必注意适当混匀后使用。
为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D0412 | 毕赤酵母GS115甘油菌 | 200μl |
D0413 | 毕赤酵母KM71甘油菌 | 200μl |
D0414 | 毕赤酵母X-33甘油菌 | 200μl |
D2881-1µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 1µg |
D2881-100µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 100µg |
D2882-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin | 1µg |
D2882-100µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin | 100µg |
D2883-1µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
D2883-100µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |
D2884-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
D2884-100µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |