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核酸相关> 菌种与质粒> 原核载体
pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒)
产品编号: D3002-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3002-1μg pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) 1μg 888.00元
D3002-100μg pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) 100μg 1169.00元

pET-N-His-Avi是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)之前含有His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag),目的蛋白表达后在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下,BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上,从而对目的蛋白进行生物素标记。本质粒为卡那霉素(Kanamycin)抗性。

Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签,在ATP和生物素存在的条件下,BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素,从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小,只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记,生物素标记效率高,可重复性好;体内或体外均可进行标记,标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高,从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等;相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记,BirA催化的反应条件更温和,对被标记蛋白活力影响小,酶活效率高,标记特异性强[1]。

本质粒表达的目的蛋白可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等进行纯化。

pET-N-His-Avi质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 ori 12-467
Kanamycin 560-1375
ori 1467-2085
bom 2271-2413
rop 2515-2706
lacI 3515-4597
T7 promoter 4984-5002
lac operater 5003-5027
His tag 5077-5094
Avi tag 5101-5145
Multiple cloning site 5164-5197
His tag 5198-5215
T7 terminator 5282-5329

pET-N-His-Avi质粒(5354bp)的图谱如下:

pET-N-His-Avi表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3002 pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒).pdf

pET-N-His-Avi中没有的酶切位点包括:

AarI AatI AatII AbsI Acc36I Acc65I Acc113I
AcvI AflII AgeI AhdI AhlI AjiI AleI
AscI AsiGI Asp718I AspA2I AspEI AsuII AsuNHI
AvrII AxyI BaeI BalI BbrPI BbvCI BcuI
BfrI BfuAI BlnI BmcAI BmeRI BmgBI BmtI
BplI Bpu14I BsaI Bse21I BseRI BshTI BsiWI
Bso31I Bsp119I Bsp1407I BspMI BspOI BspTI BspT104I
BspTNI BsrGI Bst98I BstAFI BstAUI BstBI BstSNI
Bsu36I BtrI BveI Cfr42I CpoI CsiI CspI
Csp45I CspAI CspCI DraI DriI Eam1105I Eco31I
Eco72I Eco81I Eco105I Eco147I FalI FauNDI FseI
I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI KpnI KspI MabI
MauBI MfeI MlsI MluNI MreI MscI Msp20I
MspCI MssI MunI Nb.BbvCI NdeI NheI NspV
Nt.BbvCI OliI PacI PalAI PasI PceI Pfl23II
PI-PspI PI-SceI PinAI PmaCI PmeI PmlI PspCI
PspLI PsrI PstI RigI RsrII Rsr2I SacII
SanDI SbfI ScaI SdaI SexAI SfiI Sfr303I
SfuI SgrBI SgrDI SgsI SmiI SnaBI SpeI
SrfI Sse8387I SseBI SspBI SstII StuI SwaI
Vha464I XmaJI ZraI ZrmI

pET-N-His-Avi中的单酶切位点包括:

AlwNI CAG,NNN`CTG 1732 NcoI C`CATG,G 5069
ApaI G,GGCC`C 4039 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4042
AsiSI GCG,AT`CGC 945 NotI GC`GGCC,GC 5184
BamHI G`GATC,C 5152 NruI TCG|CGA 1286
BclI T`GATC,A 4228 PaeR7I C`TCGA,G 5192
BglI GCCN,NNN`NGGC 3185 PciI A`CATG,T 2141
BglII A`GATC,T 4964 PflFI GACN`N,NGTC 2399
BlpI GC`TNA,GC 5271 PpuMI RG`GWC,CY 3136
BspDI AT`CG,AT 1250 PshAI GACNN|NNGTC 3401
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2258 PsiI TTA|TAA 370
BssHII G`CGCG,C 3831 PspOMI G`GGCC,C 4035
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4566 PspXI VC`TCGA,GB 5192
BstEII G`GTNAC,C 4060 PvuI CG,AT`CG 945
BstZ17I GTA|TAC 2374 SacI G,AGCT`C 5168
ClaI AT`CG,AT 1250 SalI G`TCGA,C 5171
DraIII CAC,NNN`GTG 245 SapI GCTCTTCN`NNN, 2258
EagI C`GGCC,G 5184 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
Eco53kI GAG|CTC 5166 SmaI CCC|GGG 1069
EcoRI G`AATT,C 5158 SphI G,CATG`C 4775
EcoRV GAT|ATC 3796 TspMI C`CCGG,G 1067
FspI TGC|GCA 3164 Tth111I GACN`N,NGTC 2399
HindIII A`AGCT,T 5177 XbaI T`CTAG,A 5030
HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5192
MluI A`CGCG,T 4242 XmaI C`CCGG,G 1067

pET-N-His-Avi质粒中推荐使用的测序引物序列如下: T7-R (4984-5003): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'

pET-N-His-Avi的全序列信息:D3002 pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3002-1µg pET-N-His-Avi 1µg
D3002-100µg pET-N-His-Avi 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
参考文献:
1.Millard G.Cull, Peter J.Schatz. Methods in Enzymology. 2000. Volume 326:430-440.
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产品编号 产品名称 包装
D3002-1µg pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) 1µg
D3002-100µg pET-N-His-Avi (Avi标签原核表达质粒) 100µg
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D3005-100µg pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) 100µg
D3007-1µg pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) 1µg
D3007-100µg pET-N-Avi-His-SUMO3 (Avi标签原核表达质粒) 100µg
D3009-1µg pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) 1µg
D3009-100µg pET-N-His-SUMO3-Avi (Avi标签原核表达质粒) 100µg
D3011-1µg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) 1µg
D3011-100µg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) 100µg
D3013-1µg pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) 1µg
D3013-100µg pET-Dual-His-MCS-Avi-BirA (生物素标记原核表达质粒) 100µg
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