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核酸相关> 菌种与质粒> 生物素标记质粒
pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒)
产品编号: D3011-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3011-1μg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) 1μg 888.00元
D3011-100μg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA (生物素标记原核表达质粒) 100μg 1169.00元

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达生物素标记蛋白的质粒。该质粒带有两组T7启动子/lac操作子和核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS) ,其中一组的多克隆位点(multiple cloning sites,MCS)前有His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag),另一组用于表达带有S标签(S tag)的生物素连接酶(biotin ligase) BirA,因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白和BirA的共表达。在ATP和生物素(Biotin)存在的条件下,细胞内表达的生物素连接酶BirA催化Biotin共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上,从而可以在表达目的蛋白的同时进行生物素标记。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。

Avi标签(Avi tag)是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签,在ATP和生物素存在的条件下,生物素连接酶BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素,从而实现目的蛋白的生物素标记。

生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小,只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记,生物素标记效率高,可重复性好;体内或体外均可进行标记,标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高,从而使Avi tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等;相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记,BirA催化的反应条件更温和,对被标记蛋白活力影响小,酶活效率高,标记特异性强。

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
T7-1 promoter 6362-6378
His tag 77-94
Avi tag 101-145
Multiple Cloning Sites 152-202
T7-2 promoter 260-278
BirA 349-1311
S tag 1324-1368
T7 Terminator 1420-1467
f1 origin 1504-1959
Ampicillin 2074-2934
ori 3108-3696
lacI 4889-5971

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒(6378bp)的图谱如下:

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA表达基因的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D3011 pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA(生物素标记原核表达质粒).pdf

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA中没有的酶切位点包括:

AatI AatII AbsI Acc65I AcvI AgeI AhlI
AjiI AleI AsiGI AsiSI Asp718I AsuII AsuNHI
BaeI BbrPI BcuI BglII BmgBI BmtI BoxI
BplI Bpu14I BshTI BsiWI Bsp68I Bsp119I BspOI
BspT104I BstBI BstPAI BstSNI BtrI BtuMI Cfr9I
Cfr42I CpoI CspI Csp45I CspAI CspCI Eco32I
Eco72I Eco105I Eco147I EcoRV EcoT22I FalI FseI
FspAI I-CeuI I-PpoI I-SceI KpnI KspI MabI
MauBI MfeI Mph1103I MreI MssI MunI NheI
NruI NsiI NspV OliI PceI Pfl23II PI-PspI
PI-SceI PinAI PmaCI PmeI PmlI PshAI PspCI
PspLI PsrI RgaI RigI RsrII Rsr2I SacII
SanDI SexAI SfaAI SfiI Sfr303I SfuI SgfI
SgrBI SgrDI SmaI SmiI SnaBI SpeI SrfI
SseBI SstII StuI SwaI TspMI XmaI XmaCI
ZraI Zsp2I

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA中的单酶切位点包括:

AarI CACCTGCNNNN`NNNN, 1127 NcoI C`CATG,G 69
AflII A`CRYG,T 209 NdeI CA`TA,TG 344
AhdI GACNN,N`NNGTC 2147 NotI GC`GGCC,GC 196
AscI GG`CGCG,CC 171 PacI TTA,AT`TAA 1387
AvrII C`CTAG,G 1391 PaeR7I C`TCGA,G 1312
BamHI G`GATC,C 152 PasI CC`CWG,GG 432
BbvCI CC`TCA,GC 829 PciI A`CATG,T 3752
BlpI GC`TNA,GC 1409 PflFI GACN`N,NGTC 4010
BsmI GAATG,CN` 555 PpuMI RG`GWC,CY 4747
BspQI GCTCTTCN`NNN, 3869 PsiI A`CATG,T 1862
BsrGI T`GTAC,A 236 PspXI VC`TCGA,GB 1312
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 5940 PvuI CG,AT`CG 2517
BstEII G`GTNAC,C 5434 SacI G,AGCT`C 168
BstZ17I GTA|TAC 3985 SalI G`TCGA,C 183
Bsu36I CC`TNA,GG 1294 SapI GCTCTTCN`NNN, 3869
DraIII CAC,NNN`GTG 1737 ScaI AGT|ACT 2627
Eco53kI GAG|CTC 166 SgrAI CR`CCGG,YG 6297
EcoRI G`AATT,C 158 SphI G,CATG`C 9149
FspI TGC|GCA 2369 SspI AAT|ATT 1942
HindIII A`AGCT,T 189 Tth111I GACN`N,NGTC 4010
HpaI GTT|AAC 5114 XbaI T`CTAG,A 30
MluI A`CGCG,T 5616 XhoI C`TCGA,G 1312

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

T7-R (259-279): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'

pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA的全序列信息:D3011 pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA序列信息.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3011-1µg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA 1μg
D3011-100µg pET-Dual-His-Avi-MCS-BirA 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转化。
3.本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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