产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D4716-1μg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1μg | 888.00元 |
D4716-100μg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100μg | 1169.00元 |
pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞(Drosophila Schneider 2)诱导型表达质粒。本质粒与pMT/V5-His B (D4719)和pMT/V5-His C (D4721)的区别在于多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)的阅读框不同,便于重组蛋白与C端V5标签和His标签的融合表达。碧云天同时提供相应的阳性对照质粒pMT/V5-His/lacZ (D4712)。
S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。
本质粒采用的MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)受重金属离子的(Zn2+, Cd2+)的严格调控,因此S2果蝇细胞可通过加入CuSO4或CdCl2瞬时高效启动外源基因表达。建议使用500-1000μM CuSO4或10μM CdCl2诱导外源基因表达。CuSO4细胞毒性低于CdCl2,CdCl2启动效率高于CuSO4 [3]。碧云天同时提供组成型Ac5启动子系列产品:pAc5.1/V5-His A (D4751)、pAc5.1/V5-His B (D4755)、pAc5.1/V5-His C (D4759)。
本质粒不带有分泌信号肽(Secretion signal peptide),如果插入基因不带有原生分泌信号肽,重组蛋白将在S2果蝇细胞内表达。如果需要重组蛋白分泌到培养基上清中,建议购买含有BiP分泌信号肽的质粒:pMT/BiP/V5-His A (D4727)、pMT/BiP/V5-His B (D4732)或pMT/BiP/V5-His C (D4735)。
本质粒的克隆插入基因应包含一个带有ATG启动密码子的Kozak翻译启动序列((G/A)NNATGG),以便正确启动重组蛋白的表达。
本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到含有目的基因的诱导型S2果蝇稳定细胞株。建议在筛选稳定细胞株之前,先通过瞬时转染测试重组蛋白能否表达。
本质粒在多克隆位点之后含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。
本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。
pMT/V5-His A质粒的图谱如下:
pMT/V5-His A质粒的主要信息如下:
Base pairs | 3538 |
M13 Forward | 379-395 |
MT promoter | 411-833 |
MCS (Multiple Cloning Site) | 849-929 |
V5 Tag | 930-971 |
6X His Tag | 981-998 |
SV40 poly (A) signal | 1040-1174 |
M13 Reverse | 1318-1334 |
lac operator | 1342-1358 |
lac promoter | 1366-1396 |
CAP binding site | 1411-1432 |
ori | 1720-2308 |
Ampicillin | 2479-3339 |
Ampicillin promoter | 3340-3444 |
pMT/V5-His A的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4716 pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒).pdf
pMT/V5-His A中没有的酶切位点包括:
AarI | AatI | AbsI | AccIII | AccB7I | AcvI | AdeI |
AfeI | AflII | AjuI | AleI | AlfI | AloI | Aor13HI |
Aor51HI | AscI | AsiSI | AspI | AspA2I | AsuNHI | AvrII |
AxyI | BamHI | BanIII | BarI | BbrPI | BbsI | BbvCI |
BfrI | BglII | BlnI | BlpI | BmtI | BoxI | BpiI |
BplI | Bpu10I | Bpu1102I | BpuAI | Bsa29I | BsaAI | Bse21I |
BseAI | BseCI | BsePI | BshVI | BsiWI | Bsp13I | Bsp19I |
Bsp68I | Bsp1407I | Bsp1720I | BspDI | BspEI | BspOI | BspTI |
BspXI | BsrGI | BssHII | BssNAI | BssT1I | Bst98I | Bst1107I |
BstAFI | BstAUI | BstBAI | BstDSI | BstEII | BstENI | BstPI |
BstPAI | BstSNI | BstV2I | BstZ17I | Bsu15I | Bsu36I | BsuTUI |
BtgI | BtgZI | BtuMI | CelII | Cfr9I | Cfr42I | ClaI |
CpoI | CsiI | CspI | CspCI | DraIII | Ecl136II | Eco47III |
Eco53kI | Eco72I | Eco81I | Eco91I | Eco105I | Eco130I | Eco147I |
EcoICRI | EcoNI | EcoO65I | EcoT14I | EcoT22I | ErhI | FalI |
FseI | FspAI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI | Kpn2I |
KspI | MabI | MauBI | Mph1103I | MreI | MroI | MspCI |
Nb.BbvCI | Nb.Bpu10I | NcoI | NheI | NruI | NsiI | Nt.BbvCI |
Nt.Bpu10I | OliI | PacI | PalAI | PasI | PauI | PceI |
Pfl23II | PflFI | PflMI | PI-PspI | PI-SceI | PmaCI | PmlI |
Ppu21I | PpuMI | PshAI | Psp5II | Psp124BI | PspCI | PspEI |
PspLI | PspPPI | PsrI | PsyI | PteI | RgaI | RigI |
RruI | RsrII | Rsr2I | SacI | SacII | SanDI | SexAI |
SfaAI | SfiI | Sfr303I | SgfI | SgrAI | SgrBI | SgrDI |
SgsI | SmaI | SmiI | SnaBI | SrfI | SseBI | SspBI |
SstI | SstII | StuI | StyI | SwaI | TspMI | Tth111I |
Van91I | Vha464I | XagI | XcmI | XmaI | XmaCI | XmaJI |
Zsp2I |
pMT/V5-His A中的单酶切位点包括:
AatII | AccI | Acc65I | AgeI | AhdI | AlwNI | ApaI |
AvaI | BanII | BfuAI | BmeT110I | BmgBI | BpmI | BseRI |
BseYI | BsgI | BsoBI | BspMI | BspQI | BstAPI | BstBI |
EcoRI | EcoRV | HpaI | KasI | KpnI | MfeI | MluI |
MscI | NarI | NmeAIII | NotI | PaeR7I | PciI | PfoI |
PluTI | PmeI | PsiI | PspFI | PspOMI | PspXI | SalI |
SapI | SbfI | ScaI | SfoI | SpeI | SspI | XhoI |
ZraI |
pMT/V5-His A质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
M13 Forward (379-395): 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'
M13 Reverse (1318-1334): 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'
pMT/V5-His A的全序列信息: D4716 pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 全序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4716-1µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4716-100µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D4701-1µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4701-100µg | pCoPuro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4705-1µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4705-100µg | pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4708-1µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 1µg |
D4708-100µg | pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) | 100µg |
D4712-1µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4712-100µg | pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4716-1µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4716-100µg | pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4719-1µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4719-100µg | pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4721-1µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4721-100µg | pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4724-1µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4724-100µg | pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4727-1µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4727-100µg | pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4732-1µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4732-100µg | pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4735-1µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4735-100µg | pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4739-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4739-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4742-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4742-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-mCherry (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4745-1µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 1µg |
D4745-100µg | pMT/BiP/V5-His/CoPuro-P2A-ZsGreen (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) | 100µg |
D4748-1µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 1µg |
D4748-100µg | pAc5.1/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) | 100µg |
D4751-1µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4751-100µg | pAc5.1/V5-His A (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4755-1µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4755-100µg | pAc5.1/V5-His B (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |
D4759-1µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 1µg |
D4759-100µg | pAc5.1/V5-His C (S2果蝇细胞组成型表达质粒) | 100µg |