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Blood PCR Enhancer (2X)
产品编号: D7245
产品包装:2ml
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2ml
价格:¥72.00元
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D7245 Blood PCR Enhancer (2X) 2ml 72.00元

碧云天研发的Blood PCR Enhancer (2X),即耐血PCR增强剂(2X),是一种使用碧云天的D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)D7243 HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)时,克服因模板高GC含量所导致的PCR扩增障碍的PCR增强剂。高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点,本产品可用于含有肝素、柠檬酸钠以及EDTA等抗凝血的直接PCR反应,从而大大提高了高GC含量DNA模板的扩增效率及扩增的特异性。本产品也可以用于普通PCR时扩增高GC含量的目的片段。
Blood PCR Enhancer (2X)可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶,如碧云天的D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)D7243 HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant),NEB的Hemo KlenTaq等。
本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果参考图1。
图1.使用Blood PCR Enhancer (2X)扩增高GC含量目的基因的电泳效果图。图A中可见,HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%),在添加Blood PCR Enhancer (2X)后可以扩增出单一的非常明亮的特异性条带,但不添加时就不能扩增获得特异性的目的条带。图B中可见,扩增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)时,使用碧云天生产的本产品能扩增出单一的条带,而使用公司A和B的类似产品主带比较微弱并且杂带很多,使用常见的最终浓度为1.3M的甜菜碱(Betaine)的扩增高GC含量的该片段时效果也欠佳。
本产品如果用于50微升的PCR反应体系,足够用于80个反应;如果用于20微升的PCR反应体系,足够用于200个反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7245 Blood PCR Enhancer (2X) 2ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
在使用本产品Blood PCR Enhancer (2X)的同时,必须同时使用和耐血DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的PCR Buffer。
本产品溶解时如果有结晶状沉淀物,可以在50℃水浴温育片刻促进溶解,并确保完全溶解后使用。
请尽量使用新近采集的抗凝血样本进行检测;如果是冻存的样本,尽量避免反复冻融,以免在冻融过程中导致目的基因的断裂和降解。
设置PCR反应体系时,抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5-10%左右,可以直接添加到PCR体系中,无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后,建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片,便于吸取上清用于电泳分析等。注意:由于抗凝血本身的原因,PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。
由于PCR反应非常灵敏,可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.PCR反应参数的设置请参照特定的耐血DNA聚合酶的说明书进行。通常对于扩增高GC含量的DNA模板,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
2.PCR反应体系的设置可以参考特定的耐血DNA聚合酶进行,仅仅添加反应总体积一半的本试剂盒所提供的Blood PCR Enhancer (2X)即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:
a.融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将HemoTaq™ DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
b.参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应,可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和HemoTaq™酶的混合物,然后分装到各PCR反应管内。根据情况,有时混合物中也可以包括引物):

试剂 20μl体系 50μl体系 终浓度
Nuclease-Free Water (4-x)μl (10-y)μl -
10X HemoTaq™ PCR Buffer 2μl 5μl 1X
Blood PCR Enhancer (2X) 10µl 25µl 1X
dNTP (2.5mM each) 2μl 5μl 0.25mM each
引物混合物(10μM each) 1μl 2.5μl 0.5μM each
HemoTaq™ DNA Polymerase 1μl 2.5μl -
抗凝全血 xμl yμl -
总体积 20μl 50μl

注意:
(a)模板使用量:作为PCR模板的抗凝血用量一般为PCR反应体系总体积的1-20%,建议起始使用量为5%。如果PCR反应用于检测基因组的DNA片段,可以适当减少抗凝血用量;如果用于检测血液样品中某种病毒或细菌等微生物的目的DNA片段,建议使用50μl的PCR体系,并使用较大的模板血量。对于高GC含量的PCR扩增,可以使用扩增高GC含量DNA片段的D7245 Blood PCR Enhancer (2X),或者尝试向PCR体系中加入终浓度1-10% (体积百分比)的DMSO。
(b)引物浓度:通常引物的终浓度为0.5μM时可获得良好的检测效果,也可以根据情况在0.1-1.0μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度。
c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。
d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油(ST275 Mineral oil (矿物油))。
e.把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上,开始PCR反应。PCR反应参数的设置可以参考该耐血DNA聚合酶的常规参数,同时可以考虑适当延长延伸时间。

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