碧云天生产的猫细小病毒(FPV)等温扩增荧光检测试剂盒，即Feline Panleukopenia Virus (FPV) Fluorescence LAMP Assay Kit，也称猫细小病毒(猫泛白细胞减少症、猫瘟)等温扩增荧光检测试剂盒、Feline Parvovirus (FPV) Fluorescence LAMP Assay Kit，是一种通过环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification, LAMP)法扩增猫细小病毒DNA，并通过荧光定量PCR仪的荧光曲线来判断猫是否感染细小病毒的试剂盒。本试剂盒采用了dU掺入和UDG酶，能有效防止等温扩增产物污染导致的假阳性，可快速、有效、高灵敏度地检测猫细小病毒。

猫细小病毒(Feline panleukopenia virus or parvovirus, FPV)，又称猫瘟热病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性肠炎病毒，是一种单链DNA病毒，属于细小病毒科细小病毒属。在电子显微镜下，FPV呈圆形或六角形，无囊结构[1]。基因组长度约为5200nt，包含两个开放阅读框(Open reading frame, ORF)，分别编码结构蛋白(VP1和VP2)和非结构蛋白(NS1和NS2)。受FPV感染的动物白细胞急剧下降，同时伴有严重的发热、呕吐、腹泻等症状。病毒主要侵害幼猫，几乎所有猫科动物易感，死亡率较高，可通过患病动物的粪便、尿液和呕吐物迅速传播，在可妊娠期间垂直传播，导致胎儿小脑发育不全。因此，早期和快速诊断FPV是非常必要的，以便分离受感染的猫并实施针对性治疗，降低发病率和死亡率。

FPV感染的主要症状为发热、呕吐、腹泻，在临床上极易与其它胃肠道疾病混淆，因此仅依靠临床表现来诊断是否感染FPV较为困难。到目前为止，临床诊断FPV感染的方法有电子显微镜(Electron microscope, EM)、病毒分离(Virus isolation, VI)、乳胶凝集(Latex agglutination test, LAT)、血球凝集(Hemagglutination, HA)、ELISA和PCR分析等[2]。虽然电子显微镜和病毒分离较为特异和敏感，但这些技术在临床使用过程中昂贵且耗时。乳胶凝集法虽然检测速度快，但缺乏特异性。对于血球凝集或血清凝集抑制实验，由于FPV血凝活性弱且该方法对操作条件要求较高，相关实验条件较为苛刻，在临床检测中也易出现假阴性结果。此外，虽然ELISA和PCR因其高灵敏度和特异性被广泛使用，但仍需配备相关的仪器设备，相关检测人员也需具有相应的技术能力，导致该方法的适用性受到一定的限制。

等温扩增技术(Isothermal amplification technology)是核酸体外扩增技术，其反应过程始终维持在一定的恒定温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物进行核酸的快速扩增[3]。本试剂盒采用的是环介导核酸等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)，其特点是针对靶基因的6个区域设计4-6条特异引物，使用链置换DNA聚合酶(Bst DNA Polymerase)启动DNA的合成，形成哑铃状互补链，并进一步通过连续链置换进入循环扩增阶段，扩增的最后产物是具有不同个茎环结构、多环花椰菜样结构的DNA的混合物。LAMP仅需在等温条件下(如60-65ºC)保温30-60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相比，LAMP不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，具有简单、快速、灵敏性高、特异性强等特点[4]。本试剂盒以猫细小病毒VP2基因最保守的区域作为LAMP靶点，设计特异性并对于猫细小病毒的大部分突变体有兼容性的引物。

本试剂盒灵敏度高，反应时间短。本试剂盒的灵敏度比传统的PCR方法高2-5倍，通过阳性质粒计算检测下限约为20-500 copies/μl，且仅需45分钟就能完成检测反应。本试剂盒用于阳性质粒的检测效果参考图1。

图1.碧云天猫细小病毒(FPV)等温扩增荧光检测试剂盒(D7589)的检测效果图。红色为本试剂盒中的阳性对照，蓝色为本试剂盒中的Nuclease-free water作为阴性对照。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒特异性强。本试剂盒根据猫细小病毒保守序列设计6条特异引物，不会与其它生物的DNA发生交叉反应。

本试剂盒采用防污染技术，有效避免污染。本试剂盒使用了dU和热敏型UDG酶，可以使扩增产物中掺入dU并且在等温扩增前37ºC孵育5-15分钟可有效消除等温扩增过程中带来的产物污染问题。在进行等温扩增时，热敏型UDG酶会被失活，从而不会干扰后续的等温扩增检测。

本试剂盒提供了阳性对照Positive Control，可用于确定试剂盒是否能正常工作，建议每次检测都设置阳性对照。

本产品如果用于常规的20µl反应体系，小包装可以进行25次检测，中包装可进行100次检测。

-20ºC保存，一年有效。其中LAMP Fluorescence Master Mix with UDG (2X)需避光保存。尽量避免反复冻融。

使用前需确保试剂完全融化，上下颠倒轻轻混匀后使用。混匀过程中尽量避免产生气泡。

经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。

等温扩增是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。等温扩增反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。尽管本试剂盒采用UDG酶防污染技术，但请仍勿打开PCR管盖，等温扩增产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的扩增产物由于气溶胶等因素污染实验环境。

本等温扩增体系需要高浓度的二价离子，样品中不能含有高浓度的EDTA等金属离子螯合剂。

建议使用带滤芯的吸头配制等温扩增体系，可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

移液器使用前后建议使用DNA清除试剂处理，以避免可能的假阳性。推荐使用RNase, DNase, RNA and DNA Away (R0127)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。