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生物素检测封闭试剂盒
产品编号: P0101
产品包装:200次
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价格:¥242.00元
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P0101 生物素检测封闭试剂盒 200次 242.00元

碧云天生产的生物素检测封闭试剂盒(Biotin Assay Blocking Kit),是一种主要用于SABC (Streptavidin-Biotin Complex)法或ABC (Avidin-Biotin Complex)法等基于生物素和链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)进行免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)、免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC)、免疫荧光(immunofluorescence, IF)、原位核酸杂交等检测过程中,对组织及细胞样品进行封闭以显著降低背景的试剂盒。
基于生物素的检测技术,例如SABC法、ABC法等可以显著提高检测灵敏度,是常见的实验室检测技术。但有时会受内源性的生物素和生物素结合蛋白等的影响而产生一定的背景。
本试剂盒不仅可以封闭内源性的生物素和生物素结合蛋白,也能封闭样本对于streptavidin或avidin的非特异性结合。
按照本试剂盒推荐的条件,生物素检测相关的封闭可以和常规的免疫染色封闭同时进行,显著节约封闭时间。
一些细胞和组织,如肾脏、肝脏和脾脏等含有一定量的内源性生物素或者生物素结合蛋白,利用SABC法或ABC法等进行IHC、ICC、IF和原位杂交等实验时,它们会结合streptavidin或avidin、生物素标记的辣根过氧化物酶(biotinylated horseradish peroxidase)或生物素标记的碱性磷酸酶(biotinylated alkaline phosphatase)等而产生较高的非特异性染色背景,从而产生假阳性结果。此外,样本和streptavidin或avdin可能存在的非特异性结合也会导致一定的背景染色。因此,使用生物素检测封闭液对细胞和组织进行封闭预处理是非常必要的,使用本试剂盒可以有效减少非特异性染色,提高检测灵敏度。
本试剂盒含两种封闭液,Biotin Blocking Buffer (100X)中含有streptavidin等,可以充分结合并封闭内源性的生物素,并可以减少后续对于标记的streptavidin的非特异性结合;Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X)中含有生物素,可以充分封闭内源性生物素结合蛋白以及前一步封闭时结合的streptavidin。通过两步法的封闭,可以达到显著降低背景的目的。
本试剂盒适用于冰冻切片和石蜡切片的封闭,也适用于培养细胞的封闭。
按照每封闭一个样品需要两种封闭液各100μl计算,一个包装的本试剂盒可以封闭200个样品。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P0101-1 Biotin Blocking Buffer (100X) 200μl
P0101-2 Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X) 200μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
使用本试剂盒推荐的条件进行封闭后,无需再进行常规的免疫染色封闭操作步骤。推荐条件下,本试剂盒能同时进行生物素相关的封闭和常规封闭。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 用于IHC、ICC、IF等免疫染色检测的封闭:
a. 封闭液的稀释:试剂盒提供的Biotin Blocking Buffer (100X)和Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X)根据所需的用量,使用适当的常规封闭液稀释为1X的Biotin Blocking Buffer和Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer。推荐使用碧云天的QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260)免疫染色封闭液(P0102)
b. 在样品固定并充分洗涤后,并且在一抗孵育之前,滴加适量Biotin Blocking Buffer,孵育10-30min。使用QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260),推荐孵育10min;使用普通封闭液进行稀释时,推荐孵育30min。
c. 洗涤液洗涤样品5min×3次。推荐使用碧云天的免疫染色洗涤液(P0106/P0106C/P0106L)。
d. 滴加适量Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer,孵育10-30min。使用QuickBlock™免疫染色封闭液(P0260),推荐孵育10min;使用普通封闭液进行稀释时,推荐孵育30min。
e. 洗涤液洗涤样品5min×3次。推荐使用碧云天的免疫染色洗涤液(P0106/P0106C/P0106L)。
f. 接着按照常规步骤进行一抗孵育等后续操作。
注:上述生物素相关的两步封闭步骤也可以在一抗孵育完毕并用洗涤液洗涤3-4次后进行,随后再进行二抗孵育等步骤。
2. 用于原位杂交等核酸检测的封闭:
a. 封闭液的稀释:试剂盒提供的Biotin Blocking Buffer (100X)和Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X)根据所需的用量,使用适当的稀释液稀释为1X的Biotin Blocking Buffer和Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer。推荐使用碧云天的洗涤液(5X, D3308专用) (D3308W)进行稀释,或其它适当的用于原位杂交的洗涤液进行稀释。
b. 在生物素标记探针杂交前,滴加适量Biotin Blocking Buffer,孵育15-30min。
c. 用洗涤液洗涤样品5min×3次。推荐使用碧云天的洗涤液(5X, D3308专用) (D3308W)进行洗涤。
d. 滴加适量Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer,孵育15-30min。
e. 用洗涤液洗涤样品5min×3次。推荐使用碧云天的洗涤液(5X, D3308专用) (D3308W)进行洗涤。
f. 接着按照常规的原位杂交检测步骤进行生物素标记探针杂交等后续操作。

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