产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
P0543S | Blue Native PAGE凝胶配制试剂盒 | 30-50gels | 239.00元 |
碧云天生产的Blue Native PAGE凝胶配制试剂盒(Blue Native PAGE Gel Preparation Kit),提供了配制Blue Native PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制不同浓度的Blue Native PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。Blue Native PAGE凝胶主要用于分离细胞膜、细胞浆等生物样品中10kDa-10,000kDa的生物膜蛋白及蛋白质复合物。Blue Native PAGE凝胶是以考马斯亮蓝G-250代替SDS使蛋白质复合物带上负电荷,并根据各个不同复合物的分子量差异从而在凝胶中得到分离,同时这些复合物在胶中以蓝色条带形式呈现。另外,在样品制备过程中使用一些温和的非离子型去垢剂进行溶解,从而使复合物以近似天然的状态分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技术广泛用于蛋白质、核酸及蛋白质-核酸复合物的分离纯化、检测、鉴定、分子量分析等实验,是生命科学研究中最基本的实验技术之一。常见的Western印迹(Western blot)检测就是基于PAGE的。
Blue Native PAGE (简称BN-PAGE)是Hermann Schägger等人于1991年建立的蛋白电泳技术,该电泳技术的用途包括从生物膜、细胞以及组织匀浆中分离微克量的膜蛋白复合物,线粒体疾病的临床诊断,确定蛋白质分子量和低聚物状态,通过基于抗体的凝胶位移法(Gel-shift method)测定多蛋白复合物的化学计量比(Stoichiometry),分析蛋白质-蛋白质相互作用,用于2D结晶(2D-Crystallization)和电子显微镜检测,凝胶内活性检测(In-gel activity assay),非变性电印迹和免疫检测,用于神经递质组装、蛋白质输入和凋亡的研究,以及分离超分子蛋白复合体等[1]。
在Blue Native PAGE中,生物膜样品使用一些温和的非离子去垢剂溶解,从而使复合物以近似天然的状态分离。特定的非离子去垢剂的选择取决于相关蛋白质复合物对去垢剂的稳定性,常用的去垢剂有洋地黄皂苷(Digitonin) (ST1272) [2]、十二烷基麦芽糖苷(Dodecylmaltoside, DDM)、Triton X-100 (ST795) [3]等。生物膜溶解和离心后,将阴离子染料考马斯亮蓝G-250加入到上清液中。G-250易溶于水,但由于其疏水性,也可以与蛋白质复合物相结合。BN-PAGE以考马斯亮蓝G-250代替SDS使蛋白质复合物带负电荷,由于带负电的蛋白相互排斥,蛋白质复合物聚集的可能性也大大降低。此外,与染料结合后蛋白质复合物失去疏水性,转化为水溶性。这意味着一旦G-250占据蛋白表面,BN凝胶中就无需添加SDS等去垢剂,因此,BN-PAGE中,对去垢剂敏感的蛋白变性的风险大大降低。最终,蛋白质复合物根据分子量的不同从而在胶中得到分离,在凝胶中以蓝色条带等形式呈现。若需要进一步分析复合物各个亚基的成分,还可以采用BN-PAGE结合SDS-PAGE的方式[1]。
推荐使用碧云天的BeyoGel™ Blue Native PAGE Sample Buffer (2X) (P0761)、BeyoGel™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液I (5X) (P0765)、BeyoGel™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液II (5X) (P0767)和BeyoGel™ Blue Native PAGE阳极电泳缓冲液(5X) (P0769),或参考使用说明自行配制相应的上样缓冲液或电泳液。
本试剂盒约可配制30-50块常规大小的Blue Native PAGE 4-13%梯度凝胶。具体可以配制的凝胶数量和凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P0543S-1 | 49.5% Acr-Bis (32:1) | 60ml |
P0543S-2 | Gel Buffer (3X) | 120ml |
P0543S-3 | 80% Glycerol | 40ml |
P0543S-4 | 凝胶聚合催化剂 | 0.5g |
P0543S-5 | TEMED Substitute | 0.5ml |
— | 说明书 | 1份 |
4ºC保存,一年有效。49.5% Acr-Bis (32:1)和TEMED Substitute须避光保存。Gel Buffer (3X)、80% Glycerol和凝胶聚合催化剂也可以室温保存。凝胶聚合催化剂用蒸馏水配制成10%溶液后,分装成小管-20ºC保存,通常半年内有效。
注意事项:虽然使用本凝胶配制试剂盒配制的4-13%梯度凝胶可覆盖的蛋白质分子量范围为10kDa-10,000kDa,但小于100kDa或大于700kDa的蛋白质可能不能很好地被分离[1]。如果需要检测这两类蛋白,需要进行一定的条件摸索,特别是对于60kDa以下的蛋白,应根据情况及时停止电泳,避免小分子量蛋白跑出凝胶。
Blue Native PAGE凝胶较常使用梯度胶,所以需要自备梯度胶制备器,或者需要自备两个恒流泵配合磁力搅拌器实现梯度胶的配制。
凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后,应当分装成小管-20ºC保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。
TEMED Substitute易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
TEMED Substitute易燃,有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Gel Thickness | Volume of Resolving Gel | Volume of Stacking Gel |
0.75mm | 4.0ml | 1.0ml |
1.0mm | 5.4ml | 1.5ml |
1.5mm | 8.0ml | 2.0ml |
成分 | 配制不同体积Blue Native PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
4%胶 | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 |
Ultrapure water | 2.88 | 5.75 | 11.56 | 17.36 | 23.11 | 28.75 |
Gel Buffer (3X) | 1.67 | 3.33 | 6.67 | 10.00 | 13.33 | 16.67 |
49.5% Acr-Bis (32:1) | 0.40 | 0.81 | 1.62 | 2.42 | 3.23 | 4.04 |
10%凝胶聚合催化剂 | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.30 | 0.50 |
TEMED Substitute | 0.004 | 0.008 | 0.012 | 0.016 | 0.024 | 0.04 |
成分 | 配制不同体积Blue Native PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
13%胶 | 5 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 |
Ultrapure water | 0.72 | 1.44 | 2.92 | 4.41 | 5.85 | 7.18 |
Gel Buffer (3X) | 1.67 | 3.33 | 6.67 | 10.00 | 13.33 | 16.67 |
49.5% Acr-Bis (32:1) | 1.31 | 2.63 | 5.25 | 7.88 | 10.51 | 13.13 |
80% Glycerol | 1.25 | 2.50 | 5.00 | 7.50 | 10.00 | 12.50 |
10%凝胶聚合催化剂 | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.30 | 0.50 |
TEMED Substitute | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.012 | 0.02 |
成分 | 配制不同体积Blue Native PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
3.5%胶 | 2 | 3 | 4 | 6 | 8 | 10 |
Ultrapure water | 0.67 | 1.00 | 1.33 | 2.00 | 2.67 | 3.33 |
Gel Buffer (3X) | 1.08 | 1.62 | 2.16 | 3.23 | 4.31 | 5.39 |
49.5% Acr-Bis (32:1) | 0.23 | 0.35 | 0.47 | 0.70 | 0.93 | 1.17 |
10%凝胶聚合催化剂 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.10 |
TEMED Substitute | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P0543S | Blue Native PAGE凝胶配制试剂盒 | 30-50gels |
P0545S | BeyoGel™ Blue Native PAGE预制胶(4-13%, 10孔) | 10块 |
P0546S | BeyoGel™ Blue Native PAGE预制胶(4-13%, 15孔) | 10块 |
P0761S | BeyoGel™ Blue Native PAGE Sample Buffer (2X) | 1ml |
P0761M | BeyoGel™ Blue Native PAGE Sample Buffer (2X) | 5ml |
P0765S | BeyoGel™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液I (5X) | 500ml |
P0767S | BeyoGel™ Blue Native PAGE阴极电泳缓冲液II (5X) | 500ml |
P0769S | BeyoGel™ Blue Native PAGE阳极电泳缓冲液(5X) | 500ml |