碧云天生产的BeyoMag™羧基磁珠偶联试剂盒(BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads Coupling Kit)，也称羧基化磁珠偶联试剂盒、羧基衍生化磁珠偶联试剂盒、抗体偶联试剂盒、Amine Magnetic Beads Conjugation Kit、Carboxyl Derivatized Beads Coupling Kit、Antibody Coupling Kit、Antibody Conjugation Kit，是一类采用了高质量的BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (羧基磁珠)，在特殊化学试剂(EDC和NHS)的作用下可快速、高效、灵敏、特异性地与多肽、蛋白、抗体、寡聚核苷酸等生物分子共价偶联的试剂盒。本试剂盒的偶联产物，后续可以用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用等，是医学和生命科学研究中的重要工具。

磁分离是一种利用外部磁场对磁性材料的作用力，在保留生物活性的同时结合并分离生物分子、细胞的方法，具有吸附量大、分离速度快、效率高、可重复使用、操作简单等特点[1,2]。常规的四氧化三铁微球作为常用的磁性材料磁响应性高、生物相容性极佳，但表面未经修饰，不稳定，易发生自身的聚集和沉淀。常见的含功能基团的磁珠有羧基磁珠和氨基磁珠，是在磁珠的壳层结构包被有羧基或氨基官能团，以降低磁珠本身的聚集和沉淀；羧基磁珠显酸性，在酸性缓冲液中通常用EDC/NHS等进行活化，而氨基磁珠显碱性，在碱性缓冲液中通常用戊二醛等进行活化。本系列试剂盒的羧基磁珠为羧基包覆的超顺磁性四氧化三铁微球的水相悬浮液，采用的先进技术使磁珠与高分子材料或柠檬酸完美结合，是一种新型功能化磁性微球。与传统磁珠相比，本系列试剂盒的羧基磁珠具有超顺磁性、高羧基密度、快速磁响应性、单分散性、分离速度快、回收率高、特异性强等多方面的优点，能便捷高效地与多种生物分子(多肽、蛋白、抗体等)进行高载量结合，也可作为良好的基础材料进行包被、吸附、化学改性等后续处理。同时，本系列试剂盒的羧基磁珠的聚合物/柠檬酸外壳可保护与磁珠结合的目标分子免受铁元素的负面影响。

本系列试剂盒的羧基磁珠与蛋白、抗体等生物分子共价偶联的基本原理如下。生物偶联是通过化学共价键结合生物分子的过程，生物偶联试剂含有具有反应活性的末端，可与特定功能基团(如伯氨基、巯基)反应。伯胺(-NH2)存在于每条多肽链的N-末端以及赖氨酸残基的侧链中。由于伯胺带正电荷，因此它通常在蛋白质的外表面，使其更易于偶联而不会改变蛋白质结构。碳二亚胺(Carbodiimides, EDC)和羧基反应可形成活性O-酰基异脲中间体，随后中间体被伯氨基团的亲核攻击并取代，使羧基-氨基交联。但中间体不稳定，易水解，故常在反应体系中引入N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide, NHS)或其水溶性类似物(Sulfo-NHS)以提高效率。EDC使NHS与羧基反应，生成稳定的NHS酯(NHS esters)，随后NHS酯在弱碱性条件下与伯胺反应，形成稳定的酰胺键，达到生物分子偶联的目的[3]。本系列试剂盒进行蛋白等生物分子偶联的流程参考图1。

图1. 碧云天BeyoMag™羧基磁珠偶联试剂盒生物分子偶联流程图(以偶联蛋白为例)。

本系列试剂盒使用便捷，提供了配套试剂。本系列试剂盒提供了羧基磁珠偶联反应所需的相关试剂，唯一需要自备是的抗体等待偶联的生物分子，为生物分子的偶联带来了极大的便利。同时羧基磁珠储存在特殊保护液中，不含甘油，配合试剂盒提供的缓冲液，可以通过磁性吸附实现快速高效的分离纯化，无需离心操作。

本系列试剂盒的羧基磁珠特异性强、配基密度高、结合量高。与国内外大多数的同类产品相比，本系列试剂盒的羧基磁珠羧基密度高，对带有伯氨基的生物分子具有很强的反应特异性。本系列试剂盒的羧基磁珠包含200nm、500nm和1µm三种粒径可供选择，每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，可反应结合不少于0.6mg IgG抗体，具体的最大结合量和生物分子的分子量大小等相关。

本系列试剂盒的羧基磁珠与生物分子的反应速度快。本系列试剂盒的羧基磁珠羧基密度高，羧基磁珠活化后能快速地与带有伯氨基生物分子发生偶联，节省了操作时间。

本系列试剂盒的羧基磁珠分散性和重悬性良好。本系列试剂盒的羧基磁珠进行了高分子材料修饰，避免了磁珠的团聚，使磁珠具有良好的单分散性和稳定的物理化学性质，磁珠进行生物分子偶联反应时具有很好地重复性和便捷性。

本系列试剂盒的羧基磁珠的主要指标请参考下表：

碧云天各种官能团、粒径磁珠的差异及选择：

按每次使用100μl磁珠悬液进行偶联，本系列试剂盒小包装可使用50次。

BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads 4℃保存，其它试剂-20℃保存，至少两年有效。

如有需要，也可单独订购碧云天的各种规格的羧基磁珠，如BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (200nm) (ST401)、BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (500nm) (ST403)、BeyoMag™ Carboxyl Magnetic Beads (1µm) (ST405)。

须根据生物分子的特性选择合适的功能基团及粒径的磁珠。

本系列试剂盒羧基磁珠需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

本系列试剂盒羧基磁珠使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，充分震荡或超声使磁珠呈均匀的悬浮状态。

如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。