碧云天的BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提试剂盒(BeyoMag™ Animal RNA Isolation Kit with Magnetic Beads)是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，可以从动物组织或培养的动物细胞中安全、便捷、稳定、高效、高质量地抽提总RNA的试剂盒。抽提获得的RNA包含大分子量RNA和小RNA(<200nt)，也常被称为总RNA(Total RNA)，可以用于各种常规分子生物学和生化检测等用途。

本试剂盒抽提得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。

动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA)，长链RNA通常大于200nt，而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA[1]。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等[2]。

本试剂盒抽提RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后让RNA特异性地结合到磁珠上，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。

图1.BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提盒(R0077)抽提RNA原理的示意图。

本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠纯化介质进行RNA分离纯化，能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。

本试剂盒使用便捷。本试剂盒采用磁珠纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，抽提操作过程仅15-20分钟。相比于传统的Trizol抽提法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间，降低了RNA被降解的风险。和国外同类磁珠纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。

本试剂盒抽提RNA的得率高。本试剂盒的抽提效果经反复测试，100万个HeLa细胞能抽提得到约15-20µg RNA，20mg小鼠肝组织能抽提得到约25-35µg RNA，20mg小鼠脑组织能抽提得到约10-20µg RNA(新鲜样品的得率高于冻存样品)。本试剂盒与RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)(R0026)方法及T公司同类产品的抽提效果对比参见图2。由图2可见，本试剂盒在抽提细胞样品的RNA时，抽提得到的RNA的量与碧云天的柱式试剂盒和T公司同类产品相当。

图2. BeyoMag™磁珠法动物RNA抽提盒(R0077)与RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0026)、T公司同类产品的RNA抽提效果对比。样品为新鲜培养的50万个HEK 293T细胞。洗脱液用量均为50μl。均取8μl洗脱的样品经混合2μl BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) (D0072)，在1.2%琼脂糖凝胶中电泳约30分钟后拍照。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，本图仅供参考。

本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞RNA的抽提，推荐的细胞用量为50-100万(上限可达500万)，组织用量为15-20mg (上限可达30mg)。不同的组织或细胞用量上限会有所差别，例如小鼠肝脏组织的上限可达30mg，但肌肉组织的上限约为20mg。

除DNase和Reaction Buffer (10X)以外，室温保存，一年有效。DNase和Reaction Buffer (10X) -20℃保存，一年有效。其中BeyoMag™ RNA磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。

需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的1.5/2ml磁分离架(FMS004、FMS008、FMS012、FMS016、FMS024)。。

对于富含RNase的样品(如动物组织)，建议使用前在裂解液中添加二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40mM (例如1ml裂解液中加入20µl 2M DTT)或β-巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10µl β-巯基乙醇)。含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。

如果不使用试剂盒提供的DNase I进行处理，本试剂盒抽提得到的RNA会含有少量的DNA。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时，需要在使用说明中步骤4后，在磁珠中加入适量DNase I进行消化，具体请参考使用说明。

建议使用推荐的细胞数或组织量用于RNA的抽提，否则可能导致BeyoMag™ RNA磁珠聚集而使基因组DNA消化不充分。如果基因组DNA消化不充分，可以加大DNase I的用量或延长孵育时间。DNase I如果需要加大，可以考虑订购碧云天的RNase-free的 DNase I (D7073/D7076)。

本试剂盒提供的所有试剂都是RNase-free，操作时应小心，避免被RNase污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果耗材可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。

对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。

使用冻存的细胞或组织抽提RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织略差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并导致样品中的RNA少量或部分降解。对于组织样品，推荐使用碧云天生产的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。

结合液、洗涤液中含有一定浓度的乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。