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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| S0141S | 总巯基检测试剂盒(DTNB法) | 100-200次 | 168.00元 |
| S0141M | 总巯基检测试剂盒(DTNB法) | 500-1000次 | 558.00元 |
碧云天生产的总巯基检测试剂盒(DTNB法)，即Total Sulfhydryl Assay Kit with DTNB或Total Thiol Assay Kit with DTNB，也称总游离巯基检测试剂盒、总巯基含量检测试剂盒或总巯基定量检测试剂盒，是一种高效、便捷的用于细胞培养上清液、血清、血浆、细胞及组织裂解液样品中总游离巯基含量的检测试剂盒，即暴露的或表面的游离巯基(Exposed/Surface free sulfhydryl groups)和埋藏于蛋白内部的游离巯基(Buried free sulfhydryl groups)的检测试剂盒。本试剂盒采用显色法(吸光度法)进行检测。
巯基(Sulfhydryl groups or Thiols)，又称氢硫基或硫醇基，化学式为-SH。巯基是生物系统中反应性非常强并且广泛存在的基团之一，它存在于大多数蛋白质中，也存在于一些低分子量物质中，如谷胱甘肽(GSH)、CoA、脂酸、DTT、巯基乙酸盐和游离半胱氨酸等[1]。蛋白质中的游离巯基通常可分为暴露的游离巯基(Exposed/Surface free sulfhydryl groups)和在蛋白质高级结构中的游离巯基(Buried free sulfhydryl groups)，两者之和为总游离巯基(Total free sulfhydryl groups or unbound thiols)[2]。通常，蛋白质中的游离巯基指的是暴露的游离巯基，即活性巯基，主要存在于半胱氨酸中，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应的重要基团，在蛋白质中两个巯基脱氢而形成的二硫键(-S-S-, Disulfide bonds)，使相邻多肽得以连接。本试剂盒可以同时检测暴露的游离巯基和在蛋白质高级结构中的游离巯基，即总游离巯基的检测，但不会检测已经形成二硫键的巯基。
生物体内的巯基主要为谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基，其中谷胱甘肽巯基主要参与修复氧化损伤的蛋白质和活性氧的清除[3]；蛋白质巯基则主要通过形成二硫键发挥维持蛋白质构象的作用[4]，而蛋白质中检测到增多的游离巯基则提示二硫键发生断裂，蛋白质结构发生变化。目前，巯基传统的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、液相色谱-质谱联用法(HPLC-GC)等[5]。虽然这些方法在游离巯基检测的灵敏度和准确度上有一定优势，但是样品处理和实验操作相对复杂、对仪器的要求较高、检测耗时较长、且无法同时检测多个样品。
本试剂盒采用经典的基于DTNB的游离巯基定量检测方法。5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (5,5'-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid), DTNB)，又称为6,6′-二硝基-3,3′-二硫代苯甲酸、Ellman试剂(Ellman Reagent)、二硫代硝基苯甲酸或双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫，是一种与巯基相互作用的水溶性试剂，可用于组织、蛋白质和多肽中游离巯基含量的测定，基本反应原理如下：样品中的蛋白质通过变性处理，原有构像发生改变，蛋白质肽链松散开，从而使原来埋藏于蛋白质内部的巯基(-SH)暴露，所有游离巯基(R-SH)与DTNB反应生成黄色可检测的2-硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB)和混合二硫化物(R-S-TNB)，TNB在412nm处有强吸收峰，通过酶标仪测定此处的吸光度，并以谷胱甘肽为标准品，可计算出样品中总游离巯基含量[6]。本试剂盒可同时检测暴露的或表面的游离巯基以及在蛋白质高级结构中的游离巯基，如仅需检测暴露的或表面的游离巯基，可使用游离巯基检测试剂盒(DTNB法) (S0138)，两者配合使用即可计算出在蛋白质高级结构中的游离巯基含量；如需检测蛋白质总半胱氨酸巯基含量，可使用蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法) (S0145)，配合使用总巯基检测试剂盒(DTNB法) (S0141)即可计算出蛋白质中二硫键的含量；如需检测谷胱甘肽，可使用总谷胱甘肽检测试剂盒(S0052)、GSH和GSSG检测试剂盒(S0053)。碧云天三种巯基检测试剂盒的比较可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/support/thiol-assay.htm。
图1.碧云天总巯基检测试剂盒(DTNB法) (S0141)工作原理图。
本试剂盒样品处理简单，检测速度快。对于细胞培养上清液、血清、血浆可直接检测；对于细胞及组织样品只需匀浆裂解，取上清进行检测。整个检测过程不足半小时即可完成。
本试剂盒的Assay Buffer经过优化，可螯合可以氧化巯基的二价金属离子，防止样品被氧化导致样品中巯基含量低于实际值。
本试剂盒提供了检测所需的DTNB和Assay Buffer，同时还提供GSH作为标准品或阳性对照(Positive control)。本试剂盒检测GSH标准曲线的效果如图2所示。最低检测限约为10μM。
图2.碧云天总巯基检测试剂盒(DTNB法) (S0141)用于GSH标准曲线的检测效果图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
用于96孔板检测时，本试剂盒小包装的可以进行100-200次检测，中包装可以进行500-1000次检测。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0141S-1 | Assay Buffer | 5ml |
| S0141S-2 | Denaturing Buffer | 20ml |
| S0141S-3 | GSH | 4mg |
| S0141S-4 | DTNB | 2mg |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0141M-1 | Assay Buffer | 25ml |
| S0141M-2 | Denaturing Buffer | 100ml |
| S0141M-3 | GSH | 20mg |
| S0141M-4 | DTNB | 10mg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，两年有效。4ºC保存，6个月有效。GSH和DTNB在配制成溶液后，需适当分装，-20ºC保存至少3个月有效。
注意事项：本试剂盒检测时涉及氧化还原反应，因此所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品中的还原剂例如DTT、巯基乙醇等，无法避免，则应尽量控制还原剂的总浓度低于待测样品中的巯基浓度。常用的Triton X-100、Tween-20等去垢剂都含有较高水平的过氧化物，如果必须使用去垢剂，最好使用纯度较高并注明含较低过氧化物的去垢剂。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Blank Control | Sample Group | |
| Ellman's Reagent Solution | 180μl | 180μl |
| Sample | 0μl | 20μl |
| Assay Buffer | 20μl | 0μl |
| Total Volume | 200μl | 200μl |
| Calculation Method | Formula | Note |
| 按样品质量计算 | C (μmol/mg) = B × n × VSample / WSample | VSample：细胞或组织裂解后的总体积(ml) WSample：样品质量(mg) |
| 按样品蛋白浓度计算 | C (μmol/mg) = B × n / CProtein | CProtein：样品蛋白浓度(mg/ml) |
| 按巯基浓度直接计算 | C (mM) = B × n | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| S0138S | 游离巯基检测试剂盒(DTNB法) | 100-200次 |
| S0138M | 游离巯基检测试剂盒(DTNB法) | 500-1000次 |
| S0141S | 总巯基检测试剂盒(DTNB法) | 100-200次 |
| S0141M | 总巯基检测试剂盒(DTNB法) | 500-1000次 |
| S0145S | 蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法) | 100-200次 |
| S0145M | 蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法) | 500-1000次 |
| S0052 | 总谷胱甘肽检测试剂盒 | 100次 |
| S0053 | GSH和GSSG检测试剂盒 | 共100次 |
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