化学信息：
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化学名
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[5-[2-[(2R,6S)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]-4-morpholin-4-ylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl]-2-methoxyphenyl]methanol
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简称
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KU0063794
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别名
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Ku -0063794, Ku 0063794, Ku 63794, Ku-0063794, Ku-63794, Ku63794
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中文名
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N/A
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化学式
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C25H31N5O4
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分子量
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465.54
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CAS号
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938440-64-3
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纯度
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98%
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溶剂/溶解度
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Water<1mg/ml; DMSO16mg/ml; Ethanol<1mg/ml
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溶液配制
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5mg加入1.07ml DMSO，或者每4.66mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2807-10mM用DMSO配制。
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生物信息：
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产品描述
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KU-0063794是一种有效的，高度特异性的，作用于mTORC1和mTORC2的双重mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50约为~10nM；对PI3Ks没有作用。
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信号通路
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PI3K/Akt/mTOR
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靶点
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mTORC1
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mTORC2
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－
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－
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－
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IC50
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~10nM
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~10nM
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－
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－
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－
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体外研究
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与mTOR抑制剂PP242相比，KU-0063794高特异性作用于mTOR，而对PI3Ks或其他76种激酶则无作用活性。30nM KU-0063794作用于HEK-293细胞，通过抑制疏水基团(Thr389)磷酸化，及随后的T-环残基(Thr229)磷酸化，而快速切除S6K1活性。300nM KU-0063794作用于IGF1刺激的血清饥饿处理的HEK-293细胞，抑制~90%S6K1活性。KU-0063794为100-300nM时，也完全抑制氨基酸诱导的S6K1和S6蛋白磷酸化。与S6K1类似，KU-0063794抑制mTORC1在Ser2448位点磷酸化，也抑制mTORC2在Ser22481位点磷酸化，这种作用存在剂量和时间依赖性。在血清存在时，或者IGF1刺激的情况下，KU-0063794抑制Akt活性，或者Akt在Ser473和Thr308(意外的)位点磷酸化，也抑制Akt底物PRAS40在Thr246位点，GSK3α/GSK3β在Ser21/Ser9位点及Foxo-1/3a在Thr24/Thr32位点磷酸化，以上作用存在剂量依赖性。KU-0063794而不是Rapamycin抑制SGK1活性和在Ser422位点磷酸化，也抑制其生理底物NDGR1，与抑制S6K1和Akt磷酸化程度相似，这种作用存在剂量依赖性，然而KU-0063794不抑制佛波酯诱导的ERK或RSK磷酸化和RSK激活。与Rapamycin相比，KU-0063794更有效诱导4E-BP1在Thr37，Thr46和Ser65位点完全去磷酸化。KU-0063794抑制野生型和mlST8-缺陷型MEFs细胞生长，也诱导细胞周期停在G1期，比Rapamycin效果更显著。
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体内研究
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N/A
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临床实验
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N/A
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特征
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N/A
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相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
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酶活性检测实验
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方法
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HEK-293细胞新鲜溶解在Hepes裂解液中。溶解产物(1-4mg)通过与5-20μl G蛋白的琼脂糖凝胶结合免疫前抗体IgG温育而预先清除。裂解抽提物与5-20μl G蛋白的琼脂糖凝胶结合的5-20μg抗Rictor或抗Raptor抗体的 免疫前抗体IgG温育。所有抗体共价结合到蛋白G蛋白琼脂糖凝胶上。在振动转载台上4℃下进行 免疫沉淀1小时。使用Hepes裂解液冲洗免疫沉淀物四次，随后使用Hepes激酶buffer冲洗两次。使用Raptor免疫沉淀物磷酸化S6K1，两次冲洗的初始步骤中，buffer含0.5M NaCl，确保最佳激酶活性。血清饥饿的HEK-293细胞中分离的GST-Akt1与PI-103(1μM进行1小时)温育。从血清饥饿的HEK-293细胞中纯化的GST-S6K1与Rapamycin(0.1μM进行1小时)温育。加入0.1mM ATP和10mM MgCl2，在不同浓度KU-0063794和GST-Akt1(0.5μg)或GST-S6K1(0.5μg)存在时，开始mTOR反应。反应在30℃下在振动转载台上进行30分钟，然后加入SDS样本缓冲液终止反应。反应混合物在0.22-μm-孔径大小Spin-X过滤器上过滤，样本进行电泳处理，然后使用指定抗体进行免疫印迹分析。
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细胞实验
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细胞系
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野生型和mlST8缺陷型MEFs
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浓度
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溶于DMSO，终浓度为~3μM
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处理时间
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24、48和72小时
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方法
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使用KU-0063794处理细胞24、48和72小时，每24小时更换一次培养基，加入新鲜溶解的KU-0063794。为了测量细胞生长，使用PBS冲洗细胞一次，然后与4% (v/v) 多聚甲醛在PBS混合15分钟。用水冲洗一次后，使用溶于10%乙醇的0.1%结晶紫对细胞染色20分钟，然后用水冲洗三次。使用0.5 ml 10% (v/v)乙酸从细胞中抽提结晶紫20分钟。然后洗脱液在水中按1：10稀释，然后在590nM处测量吸光值。为了测量细胞周期分布，通过胰蛋白酶化作用收集细胞，然后在PBS中冲洗一次，再悬浮于冰冻70% (v/v)乙醇中。细胞在PBS和1% (w/v) BSA中冲洗两次，再在PBS和含50g/ml碘化丙啶和50g/ml RNase A的0.1% (v/v) Triton X-100中染色20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件检测细胞中DNA含量。在线性标度上测量红色荧光(585nM)，进行脉冲宽度分析用于排除双峰值。使用FlowJo软件测定细胞周期分布。
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动物实验
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动物模型
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N/A
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配制
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N/A
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剂量
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N/A
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给药方式
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N/A
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参考文献：
1. García-Martínez JM, et al. Biochem J, 2009, 421(1), 29
包装清单：
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产品编号
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产品名称
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包装
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SF2807-10mM
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KU0063794 (mTOR抑制剂)
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10mM×0.2ml
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SF2807-5mg
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KU0063794 (mTOR抑制剂)
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5mg
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SF2807-25mg
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KU0063794 (mTOR抑制剂)
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25mg
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说明书
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1份
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保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
注意事项：
本产品对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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