产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
ST045-1g | TCEP (DTT Substitute) | 1g | 100.00元 |
ST045-5g | TCEP (DTT Substitute) | 5g | 362.00元 |
ST045-25g | TCEP (DTT Substitute) | 25g | 1319.00元 |
ST045-100g | TCEP (DTT Substitute) | 100g | 3961.00元 |
TCEP即TCEP-HCl,全称Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride,中文名为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。分子式为C9H15O6P·HCl,分子量为286.65,CAS号51805-45-9。本产品在大多数情况下可以作为DTT的替代物使用。
图1. TCEP-HCl的化学结构式。
本产品为白色粉末,纯度≥98%,易溶于水,最高可达310mg/ml (1.08M),在有机溶剂如乙醇、甲醇等中溶解度较小。TCEP直接溶解在水中时的pH约为2.5。
TCEP是一种高效、无异味、不含硫醇基的水溶性还原剂,可选择性还原多肽或蛋白质中的二硫键。TCEP具有更佳的稳定性、更广的兼容性、更强的还原性、更好的选择性,而且由于不含巯基,因此在多数应用中不必去除,从而广泛应用于生物化学和分子生物学中,特别是在蛋白质化学、蛋白质组学中,是公认的DTT的良好替代物。
TCEP对还原二硫键选择性极强,除半胱氨酸外,几乎不会与其它氨基酸有反应,并且能在更宽的pH值范围包括酸性条件下使用,从而有效减少酰胺键的水解。TCEP的反应活性温和、易溶、毒性小,且更容易操作,在酸性、碱性溶液中的稳定性都很好。
TCEP使用范围广泛,无论是普通的SDS-PAGE中蛋白的还原,还是一些特殊的实验如固相金属离子亲和层析(IMAC)、质谱、Ni柱纯化等其它需要还原二硫键的实验,也特别适用于组氨酸标记蛋白纯化、马来酰亚胺偶联半胱氨酸残基反应,它能够预防半胱氨酸残基形成二硫键,但不像DTT或β-巯基乙醇本身易与马来酰亚胺反应。
TCEP的特点有:无气味——与DTT和β-巯基乙醇不同,TCEP是无异味的,有助于创造更加健康的实验室环境;高效——5到50mM 的TCEP在数分钟内即可完全还原大多数多肽或蛋白的二硫键(与DTT等效);特异性——选择性的完全还原甚至最稳定水溶液中的烷基化二硫键;快速——在室温和pH5的条件下,不到五分钟即可还原蛋白的二硫键;稳定——耐空气氧化,无挥发性,与蛋白的其它功能基团不反应;通用性——可在广泛pH范围、盐、去垢剂、温度条件下还原多肽和蛋白;兼容性——不含巯基,因此在多数应用中不必去除还原试剂。
TCEP与DTT主要特点的比较表格如下:
主要特点 | TCEP | DTT |
气味 | 无 | 轻微的硫磺气味(臭味) |
水溶解性 | 310g/L | 50g/L |
还原性 | 维持2-3周 | 维持3-7天 |
稳定性 | 无挥发性,耐空气氧化,基本不受金属离子影响,与蛋白的其它功能基团不反应 | 挥发性弱,尽量减少暴露在空气中的时间,在Ni2+存在下,快速氧化 |
pH工作范围 | 1.5-8.5 | 6.5-9.0 |
工作浓度 | 5-50mM (大多数体系) | 1-100mM |
Ni2+柱纯化His标签的蛋白 | 适用 | 不适用 |
马来酰亚胺标记蛋白反应 | 标记前不需要去除 | 标记前需要去除 |
在SDS-PAGE电泳中,一般终浓度在25mM左右的TCEP即可足够还原蛋白样品。也可直接使用碧云天各类含TCEP的无气味的蛋白上样缓冲液(P0282、P0286、P0287、P0288、P0289、P0292)。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ST045-1g | TCEP (DTT Substitute) | 1g |
ST045-5g | TCEP (DTT Substitute) | 5g |
ST045-25g | TCEP (DTT Substitute) | 25g |
ST045-100g | TCEP (DTT Substitute) | 100g |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃或4℃保存,至少2年有效。室温保存,至少一年有效。
注意事项:
本产品用于蛋白变性时,建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟,温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟),有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
本产品在磷酸盐缓冲液中,尤其在中性或碱性磷酸盐缓冲液中很不稳定。因此若实验过程需将本产品配制在PBS缓冲液中使用,必须现配现用。
大多数蛋白无需变性剂即可高效还原,但加入盐酸胍等变性剂有助于将内部二硫键暴露而易于和TCEP发生反应。
不建议使用尿素作为变性剂,避免形成氰酸酯并与巯基反应。
尽量防止金属接触TCEP溶液,否则会一定程度降低TCEP活性。在还原过程中向样品缓冲液中加入5至20mM EDTA有助于防止巯基被二价金属离子氧化,如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
还原后样品应尽快使用,长时间放置后会重新生成二硫化物。
本产品在溶液中带电荷,因此不适用于等电聚焦(IEF)实验。
TCEP对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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