使用说明:
1.细胞按照实验设计进行适当处理后,制备成单细胞悬液,计数。取适量细胞,4ºC,500×g离心5分钟,弃上清。每个样品推荐的细胞用量为1×106。
2.加入100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711),然后轻轻重悬细胞。
3.根据相应的抗体说明书进行细胞表面抗原的免疫荧光染色。
4.向细胞悬液中加入2µl BeyoFC™ PI染色液(50X),吹打混匀后室温避光孵育10-15分钟。
注:用于活细胞与死细胞区分染色时,本染色液与细胞内免疫染色步骤不兼容。如果实验涉及到细胞内免疫染色,则需使用可兼容固定步骤的胺反应性染料,并在细胞内免疫染色开始前进行死细胞染色。
5.孵育结束后可直接使用流式细胞仪检测,PI结合DNA后的最大激发光波长为535nm,最大发射光波长为617nm。
注:在检测前,也可将细胞用BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)洗涤2-3次,最后用每个样品加入0.5-1ml BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液重悬细胞后用于检测,这样染色效果更好。
注:相关使用说明仅供参考,具体可根据细胞类型、实际检测效果及流式细胞仪配置等进行一些优化或调整,BeyoFC™ PI染色液(50X)可在0.5X-2X范围内摸索最佳工作浓度。
参考文献:
1.Arndt-Jovin DJ, Jovin TM. Methods Cell Biol. 1989. 30:417-48.
2.Waring MJ. J Mol Biol. 1965. 13(1):269-82.
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