pCMV-C-BFP

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D2621	pCMV-C-BFP	1μg	862.00元

    pCMV-C-BFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含BFP(Blue Fluorescent
Protein,蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表
达。在多克隆位点的后面有一个BFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以
表达C端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内
定位，也可以利用BFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似，可以尝试用GFP抗体检测
BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
    pCMV-C-BFP质粒的主要信息如下：
    Feature Nucleotide                                             Position
    CMV promoter                                                   1-602
    T3 promoter and T3 primer binding site                         620-639
    Multiple cloning site                                          651-740
    BFP                                                            741-1460
    T7 promoter and T7 primer binding site                         1510-1531
    SV40 polyA signal                                              1543-1926
    f1 origin of ss-DNA replication                                2064-2370
    bla promoter                                                   2395-2519
    SV40 promoter                                                  2539-2877
    Neomycin/kanamycin resistance ORF                              2912-3703
    HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal                         3704-4162
    pUC origin                                                     4291-4958
    pCMV-C-BFP质粒(5010bp)的图谱如下：

    pCMV-C-BFP的多克隆位点的详细图谱如下：
                                            SmaI             PstI
         SacI    SacII    NotI          XmaI    BamHI HindIII
     651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
         CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
             EcoRI EcoRV SalI   BglII XhoI   XbaI   BFP
     701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA ATGGTGAGCA
         CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT TACCACTCGT
     751 AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT CGAGCTGGAC
         TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG GGTAGGACCA GCTCGACCTG
     801 GGCGACGTAA ACGGCCACAA GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG GCGAGGGCGA
         CCGCTGCATT TGCCGGTGTT CAAGTCGCAC AGGCCGCTCC CGCTCCCGCT
     851 TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT CATCTGCACC ACCGGCAAGC
         ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA GTAGACGTGG TGGCCGTTCG
     901 TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCCTGAGCCA CGGCGTCCAG
         ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT GGGACTCGGT GCCGCAGGTC
     951 TGCTTCAGCC GCTACCCCGA CCACATGAAG CAGCACGACT TCTTCAAGTC
         ACGAAGTCGG CGATGGGGCT GGTGTACTTC GTCGTGCTGA AGAAGTTCAG
    1001 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG CACCATCTTC TTCAAGGACG
         GCGGTACGGG CTTCCGATGC AGGTCCTCGC GTGGTAGAAG AAGTTCCTGC
    1051 ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG CGACACCCTG
         TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT TCAAGCTCCC GCTGTGGGAC
    1101 GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC TTCAAGGAGG ACGGCAACAT
         CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG AAGTTCCTCC TGCCGTTGTA
    1151 CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTTCAA CAGCCACAAC GTCTATATCA
         GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGAAGTT GTCGGTGTTG CAGATATAGT
    1201 TGGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG CGAACTTCAA GATCCGCCAC
         ACCGGCTGTT CGTCTTCTTG CCGTAGTTCC GCTTGAAGTT CTAGGCGGTG
    1251 AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC AGCAGAACAC
         TTGTAGCTCC TGCCGTCGCA CGTCGAGCGG CTGGTGATGG TCGTCTTGTG
    1301 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAGCCAC TACCTGAGCA
         GGGGTAGCCG CTGCCGGGGC ACGACGACGG GCTGTCGGTG ATGGACTCGT
    1351 CCCAGTCCGC CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA TCACATGGTC
         GGGTCAGGCG GGACTCGTTT CTGGGGTTGC TCTTCGCGCT AGTGTACCAG
    1401 CTGCTGGAGT TCGTGACCGC CGCCGGGATC ACTCTCGGCA TGGACGAGCT
         GACGACCTCA AGCACTGGCG GCGGCCCTAG TGAGAGCCGT ACCTGCTCGA
                    ApaI
    1451 GTACAAGTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC AGGTAAGTGT
         CATGTTCATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG TCCATTCACA
    pCMV-C-BFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-BFP)包括：
    AclI       AfeI       AflII       AgeI       AhdI       AscI       AsiSI
    BaeI       BbsI       BbvCI       BlpI       BmgBI      BsiWI      BsmBI
    BspEI      BspQI      BssHII      BstEII     BstZ17I    EarI       EcoNI
    FseI       NruI       PflMI       PmeI       PmlI       PpuMI    PshAI
    PspXI    SapI       Sbf I       ScaI       SgrAI      SpeI       SwaI
    XcmI      XmnI
    pCMV-C-BFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-BFP once)包括：

      NdeI     CA`TA,TG                      240
      SnaBI    TAC|GTA                       346
      CspCI    ,NN`(N)₁₁CAA(N)₅GTGG(N)₁₀,NN` 380
      NheI     G`CTAG,C                      597
      BmtI     G,CTAG`C                      597
      SacI     G,AGCT`C                      651
      Eco53kI GAG|CTC                       653
      BstXI    CCAN,NNNN`NTGG                659
      SacII    CC,GC`GG                      660
      NotI     GC`GGCC,GC                    668
      TspMI    C`CCGG,G                      680
      XmaI     C`CCGG,G                      680
      SmaI     CCC|GGG                       682
      BamHI    G`GATC,C                      687
      HindIII A`AGCT,T                      693
      PstI     C,TGCA`G                      699
      EcoRI    G`AATT,C                      705
      EcoRV    GAT|ATC                       713
      SalI     G`TCGA,C                      717
      AccI     GT`MK,AC                      718
      BglII    A`GATC,T                      723
      XhoI     C`TCGA,G                      729
      PaeR7I C`TCGA,G                      729
      XbaI     T`CTAG,A                      735
      BcgI     ,NN`(N)₁₀CGA(N)₆TGC(N)₁₀,NN` 829
      BsrGI    T`GTAC,A                      1450
      PspOMI G`GGCC,C                      1461

ApaII G,GGCC`C &nb

PvuI

BclI MfeI HpaI BtsI MluI DraIII SfiI StuI ClaI BspDI KasI NarI SfoI RsrII

   &nb     T3 primer C-BFP primer (852-873): 5′-     pCMV-C-BFP的全序     pCMV-C-BFP质粒转               图1. 包装清单： sp;                 1461     CG,AT`CG                     1541     T`GATC,A                     1697
    C`AATT,G                     1790
    GTT|AAC                      1803
    GCAGTG,NN`                   1877
    A`CGCG,T                     1926
BsaXI    ,NNN`(N)₉AC(N)₅CTCC(N)₇,NNN` 2087
  CAC,NNN`GTG                  2153
    GGCCN,NNN`NGGCC              2812
    AGG|CCT                      2861
    AT`CG,AT                     2880
   AT`CG,AT                     2880
    G`GCGC,C                     3039
    GG`CG,CC                     3040
    GGC|GCC                      3041
PluTI    G,GCGC`C                     3039
MscI     TGG|CCA                      3122
Tth111I GACN`N,NGTC                  3158
PflFI    GACN`N,NGTC                  3158
BsrDI    GCAATG,NN`                   3271
   CG`GWC,CG                    3556
BstBI    TT`CG,AA                     3722
BsaI     GGTCTCN`NNNN,                4029
ApaLI    G`TGCA,C                     4644
PciI     A`CATG,T                     4958
sp;pCMV-C-BFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
(620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′
GGGTCAGCTTGCCGTAGGTGGC -3′
列信息：D2621 pCMV-C-BFP-seq.txt
染细胞后的表达效果请参考图1。

pCMV-C-BFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。

产品编号	产品名称	包装
D2621	pCMV-C-BFP	1μg
—	说明书	1份

保存条件：
   -20℃保存。
注意事项：
　  本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放
于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-C-BFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规
　方法转染细胞。
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