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多肽与蛋白> 蛋白检测> 免疫沉淀
Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装)
产品编号: P2009
产品包装:2ml
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2ml
价格: ¥ 550.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2009 Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装) 2ml 550.00元

本Protein G Agarose (Fast Flow)为进口分装,主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗体的纯化。
Protein G Agarose适合于免疫沉淀mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4
Protein G共价交联到4% agarose beads (Fast Flow)上,2ml Protein G Agarose中共含有约2mg重组的Protein G。2 ml Protein G Agarose共可以结合约11mg human IgG。推荐的线性流速(Linear flow rate)为 50-300cm/h。
Protein G Agarose配制在TBS溶液中,2ml中共含有0.5ml Agarose beads。 
本Protein G Agarose如果用于常规的免疫沉淀,可以免疫沉淀100次。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2009 Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装) 1ml×2
说明书 1份

保存条件:
4℃保存,一年有效。
注意事项:
请勿冷冻保存本产品。
Protein G Agarose使用前一定要充分重悬,即充分颠倒若干次使混合均匀。
从蛋白样品收集开始,所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP):
a. 蛋白样品的准备:
(a) 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液(P0013B、P0013C、P0013D或P0013E)等进行细胞的裂解。
(b) 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
(c)对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注: 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材,参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高,可以用裂解液或PBS适当稀释,如果蛋白样品浓度过低,在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
b. 去除非特异性结合(可选做)
(a)取200微升至1毫升蛋白样品,蛋白量约为200微克至1毫克,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein G Agarose,4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
(b) 2500rpm(约1000g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
注:所谓种属相同的IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG,则在本步骤中可以加入normal mouse IgG,如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein G Agarose的孵育,可以充分降低非特异性的结合,降低背景。
c.免疫沉淀:
(a) 加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动过夜。
(b) 再加入20微升充分重悬的Protein G Agarose,4℃缓慢摇动1-3个小时。(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein G Agarose的量调整为40微升。)
(c) 2500rpm(约1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein G Agarose。
(d) 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤c(c)。
(e) 完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
(f) 100℃或沸水浴处理3-5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20℃保存。
2. 免疫共沉淀:
参考免疫沉淀的方法进行,但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
3. 抗体纯化:
a. 准备工作:
(a) 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
(b) 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
(c) 选择适当的纯化柱,用适当量的Protein G Agarose装填纯化柱。
(d) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱,流速可以用恒流泵控制为1ml/min。如无恒流泵,也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
b. 抗体纯化:
(a) 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
(b) 待纯化的抗体过柱后,用10-20倍柱体积的TBS洗涤,以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
(c) 洗涤完后,用10ml 50mM glycine, pH2.7作为洗脱液,洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein G的结合能力很强,在pH2.7时洗脱效果不太理想,可以使用50mM glycine, pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体,根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
c. 纯化柱的再生:
(a) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱,使纯化柱达到中性的pH。
(b) 用TBS来保存再生的纯化柱。

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1. Liu XG, Ma SH, Sun JZ, Ren J, Shi Y, Sun L, Dong XY, Qin P, Guo CS, Hou M, Peng J.
.
Blood. 2011 Feb 10;117(6):2061-9. (IF 17.543)
2. Zhou ZL, Luo ZG, Yu B, Jiang Y, Chen Y, Feng JM, Dai M, Tong LJ, Li Z, Li YC, Ding J, Miao ZH.
.
Mol Cancer. 2010 Oct 11;9:268. (IF 15.302)
4. Li N, Kong J, Lin Z, Yang Y, Jin T, Xu M, Sun J, Chen L
.
BRIT J CANCER. 2019 Apr 120(7):703-713. (IF 5.791)
5. Zhou A, Li S, Khan FA, Zhang S.
.
Virulence. 2016;7(2):98-109. (IF 5.542)
6. Zhu Y, Wei W, Ye T, Liu Z, Liu L, Luo Y, Zhang L, Gao C, Wang N, Yu L.
.
CELL PHYSIOL BIOCHEM. 2016;40(1-2):297-308. (IF 5.5)
8. Yang Y, Jiang W, Yang S, Qi F, Zhao R
.
Mol Nutr Food Res. 2020 Feb 5:e1900823 (IF 5.309)
9. Liu X, Huang T, Chen X, Yan M, Yu F, Gu H, He C, Gu J.
.
ONCOTARGET. 2016 Jun 28;7(26):39408-39420. (IF 5.168)
10. Guo M, Huang T, Cui Y, Pan B, Shen A, Sun Y, Yi Y, Wang Y, Xiao G, Sun G.
.
BIOCHEM BIOPH RES CO. 2008 Jan 4;365(1):154-7. (IF 2.985)
12. Liu M, Wang X, Lei L, Zhao Z, Shen J.
.
Parasitol Res. 2010 Aug;107(3):615-21. (IF 1.641)
13. Huai J, Zhang Y, Liu QM, Ge HY, Arendt-Nielsen L, Jiang H, Yue SW.
.
Neurosci Lett. 2012 Mar 14;512(1):22-7. (IF 2.274)
14. Jia Y, Cong R, Li R, Yang X, Sun Q, Parvizi N, Zhao R.
.
J Nutr. 2012 Sep;142(9):1659-65. (IF 4.281)
15. Han M, Deng HY, Jiang R.
.
CHINESE J CANCER RES. 2012 Sep;24(3):213-9. (IF 4.135)
16. Guo Z, Song E, Ma S, Wang X, Gao S, Shao C, Hu S, Jia L, Tian R, Xu T, Gao Y.
.
J Proteome Res. 2012 Oct 5;11(10):4847-62. (IF 4.074)
18. Tang S, Bai C, Yang P, Chen X.
.
J Proteome Res. 2013 Jun 7;12(6):2511-24. (IF 4.074)
19. Ren J, Li D, Li Y, Lan X, Zheng J, Wang X, Ma J, Lu S.
.
Mol Cell Endocrinol. 2013 Jul 15;374(1-2):35-45. (IF 3.871)
20. Guo Z, Wang X, Li H, Gao Y.
.
PLoS One. 2013 Oct 4;8(10):e76622. (IF 2.74)
21. Wang J, Bao W, Qiu M, Liao Y, Che Q, Yang T, He X, Qiu H, Wan X.
.
Oncol Rep. 2014 Mar;31(3):1225-34. (IF 3.417)
22. Zhu Z, Liu Y, Li K, Liu J, Wang H, Sun B, Xiong Z, Jiang H, Zheng J, Hu Z.
.
Carcinogenesis. 2014 Aug;35(8):1901-10. (IF 4.603)
23. Liu Y, Zhu Z, Xiong Z, Zheng J, Hu Z, Qiu J.
.
INT J CLIN EXP PATHO. 2014 Aug 15;7(9):5750-61. (IF 0.252)
24. Li L, Gao P, Li Y, Shen Y, Xie J, Sun D, Xue A, Zhao Z, Xu Z, Zhang M, Li B, Jiang J.
.
BREAST CANCER RES TR. 2014 Oct;147(3):487-500. (IF 3.831)
25. Qi J, Xia G, Huang CR, Wang JX, Zhang J.
.
AM J CHINESE MED. 2015;43(2):337-47. (IF 3.682)
26. Li Q, Liu G, Shao D, Wang J, Yuan H, Chen T, Zhai R, Ni W, Tai G.
.
INT J BIOCHEM CELL B. 2015 Feb;59:116-25. (IF 3.673)
27. Hou N, Ren L, Gong M, Bi Y, Gu Y, Dong Z, Liu Y, Chen J, Li T.
.
Mol Neurobiol. 2015 Apr;51(2):633-47. (IF 4.5)
28. He Y, Lu L, Wei X, Jin D, Qian T, Yu A, Sun J, Cui J, Yang Z.
.
Endocrine. 2016 Mar;51(3):456-68. (IF 3.235)
29. Wang LQ, Liu JC, Chen CL, Cheng SF, Sun XF, Zhao Y, Yin S, Hou ZM, Pan B, Ding C, Shen W, Zhang XF.
.
REPROD FERT DEVELOP. 2016 Apr;28(6):700-12. (IF 1.718)
30. Xue J, Jiang W, Chen Y, Liu Y, Zhang H, Xiao Y, Qiao Y, Huang K, Wang Q.
.
PARASITE VECTOR. 2016 Jun 29;9(1):374. (IF 2.824)
31. Wang Y, Fang R, Yuan Y, Pan M, Hu M, Zhou Y, Shen B, Zhao J.
.
Parasitol Res. 2016 Jul;115(7):2825-35. (IF 1.641)
32. Jiang Q, Liu Z, Zhou Z, Wang L, Wang L, Yue F, Wang J, Wang H, Song L.
.
FASEB J. 2016 Oct;30(10):3527-3540. (IF 4.966)
33. Zhang T, Zhao L, Zeng S, Bai L, Chen J, Zhang Z, Wang Y, Duan C.
.
Int J Mol Med. 2017 Jan;39(1):126-134. (IF 3.098)
34. Hu Y, Sun Q, Zong Y, Liu J, Idriss AA, Omer NA, Zhao R.
.
GEN COMP ENDOCR. 2017 May 15;246:241-248. (IF 2.426)
35. Zhang J, Wang QZ, Zhao SH, Ji X, Qiu J, Wang J, Zhou Y, Cai Q, Zhang J, Gao HQ.
.
BBA-BIOMEMBRANES. 2017 Jul;1861(7):1715-1728. (IF 3.411)
36. Li W, Mao L, Cao Y, Zhou B, Yang L, Han L, Hao F, Lin T, Zhang W, Jiang J.
.
Virol J. 2017 Oct 23;14(1):202. (IF 2.579)
37. Yan Y, Qian H, Jiang H, Yu H, Sun L, Wei X, Sun Y, Ge H, Zhou H, Li X, Hashimoto T, Tang X, Liu P.
.
Mol Med Rep. 2018 Apr;17(4):5726-5733. (IF 2.1)
38. Hua C, Geng Y, Chen Q, Niu L, Cai L, Tao S, Ni Y, Zhao R
.
Anim Sci J. 2018 Sep;89(9):1296-1301. (IF 1.399)
39. Mo ZQ, Xu S, Cassidy-Hanley DM, Li YW, Kolbin D, Fricke JM, Li AX, Clark TG, Dan XM
.
SCI REP-UK. 2019 Jan 31 9(1):1029. (IF 3.998)
40. Yan Y, Yu H, Sun L, Liu H, Wang C, Wei X, Song F, Li H, Ge H, Qian H, Li X, Tang X, Liu P
.
AGING-US. 2019 May 10 11(9):2699-2723. (IF 4.831)
41. Cai L, Hua C, Geng Y, Chen Q, Niu L, Tao S, Ni Y, Zhao R
.
BIOCHEM BIOPH RES CO. 2019 Oct 8 518(1):7-13. (IF 2.985)
42. Yang Y, Li N, Qiu J, Ge H, Qin X
.
Int J Mol Sci. 2020 Apr 2 21(7). pii: E2469. (IF 4.556)
43. Tao Wan, Zhao Lei, Biao Tu, Tianyin Wang, Jiale Wang, Feizhou Huang
.
Front Oncol. 2021 Mar 9;11:625169. doi: 10.3389/fonc.2021.625169. (IF 4.848)
44. Xingmei Luo, Jing Wu, Guofeng Wu
.
Neurosci Lett. 2021 May 1;752:135770. doi: 10.1016/j.neulet.2021.135770. (IF 2.274)
45. Shun Yang, Xiangyu Yuan, Ting Kang, Yanting Xia, Shuqi Xu, Xintang Zhang, Wenqi Chen, Zhihong Jin, Yuanxin Ma, Zifeng Ye, Shichao Qian, Mengmeng Huang, Zhengbing Lv, Hui Fei
.
Mol Immunol. 2021 May;133:14-22. doi: 10.1016/j.molimm.2021.02.001. (IF 3.641)
46. Jie Zheng, Na Tian, Fei Liu, Yidian Zhang, Jingfen Su, Yang Gao, Mingmin Deng, Linyu Wei, Jingwang Ye, Honglian Li, Jian-Zhi Wang
.
Signal Transduct Target Ther. 2021 Jul 14;6(1):269. doi: 10.1038/s41392-021-00669-2.
47. Xiangrong Li, Ruixian Ma, Bei Wu, Yuhui Niu, Hongshan Li, Dianyu Li, Jingying Xie, Adi Idris, Ruofei Feng
.
Front Microbiol. 2021 Nov 26;12:788870. doi: 10.3389/fmicb.2021.788870. (IF 4.235)
48. Qian Li, Xiangrong Li, Bei Wu, Yuhui Niu, Ruixian Ma, Jingying Xie, Amjad Ali, Ruofei Feng
.
Virus Res. 2021 Nov;305:198547. doi: 10.1016/j.virusres.2021.198547. (IF 2.934)
49. Jiejie Sun, Liyan Wang, Wenwen Yang, Yinan Li, Yingnan Jin, Lingling Wang, Linsheng Song
.
J Biol Chem. 2021 Dec;297(6):101352. doi: 10.1016/j.jbc.2021.101352. (IF 4.238)
50. Huixing Zhou, Fulei Zhang, Yahan Wu, Hongyu Liu, Ran Duan, Yuanyuan Liu, Yan Wang, Xiaoyu He, Yuemei Zhang, Xiue Ma, Yi Guan, Yi Liu, Dandan Liang, Liping Zhou, Yi-Han Chen
.
J Cell Mol Med. 2022 May;26(10):2981-2994. doi: 10.1111/jcmm.17311. (IF 4.486)
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