pCMV-C-HA

 产品编号: D2639
 产品包装: 1μg
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2639 pCMV-C-HA 1μg 862.00元

    pCMV-C-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端与HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的
表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
    pCMV-C-HA质粒的主要信息如下:
    Feature Nucleotide                                             Position
    CMV promoter                                                   1-602
    T3 promoter and T3 primer binding site                         620-639
    multiple cloning site                                          680-740
    c-HA tag                                                       741-767
    T7 promoter and T7 primer binding site                         820-841
    SV40 polyA signal                                              853-1236
    f1 origin of ss-DNA replication                                1374-1678
    bla promoter                                                   1703-1827
    SV40 promoter                                                  1847-2185
    neomycin/kanamycin resistance ORF                              2220-3011
    HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal                         3012-3470
    pUC origin                                                     3599-4266
    pCMV-C-HA质粒的图谱如下:
    
    pCMV-C-HA的多克隆位点的详细图谱如下:
                                       XmaI                 PstI
        SacI                           Small   BamHI  HindIII
    651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
        CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
                                                            HA
            EcoRI  EcoRV SacI   BglII XhoI   XbaI   Y  P  Y  D
    701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA TACCCATACG
        CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT ATGGGTATGC
        tag              
          V  P  D   Y  A      ApaII
    751 ATGTTCCAGA TTACGCTTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC
        TACAAGGTCT AATGCGAATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG
    pCMV-C-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA)包括:
    Age I    Ahd I       Asc I     Bbs I    Bbv II      Blp I       Bsg I
    BsiW I   BsmB I      BspM II   BsrG I   BssH II     Bst1107 I   BstE II
    Ear I    Eco47 III   Eco72 I   EcoN I   Esp I       Fse I       Nru I
    PflM I   Pme I       Pml I     PpuM I   Psp1406 I   Sap I       Sca I
    Spe I    Spl I
    pCMV-C-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA once)包括:

Nde I      CA`TA,TG        241
SnaB I     TAC|GTA         347
Nhe I      G`CTAG,C        598
Sac I      G,AGCT`C        656
Sac II     CC,GC`GG        663
BstX I     CCAN,NNNN`NTGG  664
Not I      GC`GGCC,GC      669
PspA I     C`CCGG,G        681
Xma I      C`CCGG,G        681
Srf I      GCCC|GGGC       683
Sma I      CCC|GGG         683
BamH I     G`GATC,C        688
Hind III   A`AGCT,T        694
Pst I      C,TGCA`G        704
EcoR I     G`AATT,C        706
EcoR V     GAT|ATC         714
Sal I      G`TCGA,C        718
Acc I      GT`MK,AC        719
Bgl II     A`GATC,T        724
PaeR7 I    C`TCGA,G        730
Xho I      C`TCGA,G        730
Xba I      T`CTAG,A        736
Afl II     C`TTAA,G        767
Bsp120 I   G`GGCC,C        772
Apa I      G,GGCC`C        776

Pvu I      CG,AT`CG           854
Bcl I      T`GATC,A          1008
Mun I      C`AATT,G          1101
Hpa I      GTT|AAC           1114
Mlu I      A`CGCG,T          1237
Dra III    CAC,NNN`GTG       1467
Sfi I      GGCCN,NNN`NGGCC   2124
BseR I     GAGGAG 16/14      2167
Stu I      AGG|CCT           2170
Cla I      AT`CG,AT          2189
Kas I      G`GCGC,C          2348
Nar I      GG`CG,CC          2349
Ehe I      GGC|GCC           2350
Bbe I      G,GCGC`C          2352
Msc I      TGG|CCA           2431
Tth111 I   GACN`N,NGTC       2467
BsrD I     GCAATG, 8         2582
Bsp1286 I  G,DGCH`C          2652
Rsr II     CG`GWC,CG         2865
BsiC I     TT`CG,AA          3031
BstB I     TT`CG,AA          3031
Bsa I      GGTCTC 7/11       3338
HgiE II    ACCNNNNNNGGT-1/13 3678
ApaL I     G`TGCA,C          3953

    pCMV-C-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
    T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
    T7 primer(820-841): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
    pCMV-C-HA的全序列信息: D2639 pCMV-C-HA-seq.txt
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产品编号

产品名称

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D2639

pCMV-C-HA

1μg

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1份

保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-C-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间
   的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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   J Virol. 2012 Apr;86(7):3528-40. doi: 10.1128/JVI.06713-11. Epub 2012 Feb 1.
2. Xing J, Ni L, Wang S, Wang K, Lin R, Zheng C.
   HSV-1 encoded tegument protein VP16 abrogates the production of interferon β by
   inhibiting NF-κB activationand blocking IRF-3 to recruit its coactivator CBP.

   J Virol. 2013 Jul 3. [Epub ahead of print].
3. Cai M, Li M, Wang K, Wang S, Lu Q, Yan J, Mossman KL, Lin R, Zheng C.
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   PLoS One. 2013;8(1):e54586. doi: 10.1371/journal.pone.0054586. Epub 2013 Jan 28.
4. Qiu Y, Ding Y, Zou L, Tan Z, Liu T, Fu X, Xu W.
   Divergent roles of amino acid residues inside and outside the BB loop affect human Toll-
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   PLoS One. 2013 Apr 23;8(4):e61508. doi: 10.1371/journal.pone.0061508. Print 2013.
5. Zhang J, Wang S, Wang K, Zheng C.
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   Med Microbiol Immunol. 2013 May 1.




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