pCMV-N-HA

 产品编号: D2733
 产品包装: 1μg
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D2733 pCMV-N-HA 1μg 862.00元

    pCMV-N-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
    pCMV-N-HA质粒的主要信息如下:
    Feature Nucleotide                                                Position
    CMV promoter                                                      1-602
    T3 promoter and T3 primer binding site                            620-639
    HA tag                                                            679-705
    multiple cloning site                                             708-781
    T7 promoter and T7 primer binding site                            824-845
    SV40 polyA signal                                                 857-1240
    f1 origin of ss-DNA replication                                   1378-1684
    bla promoter                                                      1709-1833
    SV40 promoter                                                     1853-2191
    neomycin/kanamycin resistance ORF                                 2226-3017
    HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal                              3018-3476
    pUC origin                                                        3605-4272
    pCMV-N-HA质粒的图谱如下:
     
    pCMV-N-HA的多克隆位点的详细图谱如下:
                                              HA tag          
        SacI                       M  Y  P  Y   D  V  P   D  Y
    651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGTA CCCATACGAT GTTCCAGATT
        CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACAT GGGTATGCTA CAAGGTCTAA
               XmaI                 PstI
          A    SmaI    BamHI  HindIII      EcoRI EcoRV  SalI
    701 ACGCTAGCCC GGGCGGATCC AAGCTTCTGC AGGAATTCGA TATCGTCGAC
        TGCGATCGGG CCCGCCTAGG TTCGAAGACG TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG
        BglII        XbaI  SpeI   ApaI
    751 AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC GGTACCTTAA TTAATTAAGG
        TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG CCATGGAATT AATTAATTCC
    pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:
    Afl II    Age I    Ahd I       Asc I     Bbs I    Bbv II      Blp I
    Bsg I     BsiW I   BsmB I      BspM II   BsrG I   BssH II     Bst1107 I
    BstE II   Ear I    Eco47 III   Eco72 I   EcoN I   Esp I       Fse I
    Nru I     PflM I   Pme I       Pml I     PpuM I   Psp1406 I   Sap I
    Sca I     Spl I
    pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:

Nde I      CA`TA,TG       241
SnaB I     TAC|GTA        347
Sac I      G,AGCT`C       656
Sac II     CC,GC`GG       663
BstX I     CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I      GC`GGCC,GC     669
PspA I     C`CCGG,G       709
Xma I      C`CCGG,G       709
Srf I      GCCC|GGGC      711
Sma I      CCC|GGG        711
BamH I     G`GATC,C       716
Hind III   A`AGCT,T       722
Pst I      C,TGCA`G       732
EcoR I     G`AATT,C       734
EcoR V     GAT|ATC        742
Sal I      G`TCGA,C       746
Acc I      GT`MK,AC       747
Bgl II     A`GATC,T       752
PaeR7 I    C`TCGA,G       758
Xho I      C`TCGA,G       758
Xba I      T`CTAG,A       764
Spe I      A`CTAG,T       770
Bsp120 I   G`GGCC,C       776
Apa I      G,GGCC`C       780

Pvu I       CG,AT`CG           858
Bcl I       T`GATC,A          1012
Mun I       C`AATT,G          1105
Hpa I       GTT|AAC           1118
Mlu I       A`CGCG,T          1241
Dra III     CAC,NNN`GTG       1471
Sfi I       GGCCN,NNN`NGGCC   2130
BseR I      GAGGAG 16/14      2173
Stu I       AGG|CCT           2176
Cla I       AT`CG,AT          2195
Kas I       G`GCGC,C          2354
Nar I       GG`CG,CC          2355
Ehe I       GGC|GCC           2356
Bbe I       G,GCGC`C          2358
Msc I       TGG|CCA           2437
Tth111 I    GACN`N,NGTC       2473
BsrD I      GCAATG, 8         2588
Bsp1286 I   G,DGCH`C          2658
Rsr II      CG`GWC,CG         2871
BsiC I      TT`CG,AA          3037
BstB I      TT`CG,AA          3037
Bsa I       GGTCTC 7/11       3344
HgiE II     ACCNNNNNNGGT-1/13 3684
ApaL I      G`TGCA,C          3959

    pCMV-N-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
    T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
    T7 primer(824-845): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
    pCMV-N-HA的全序列信息: D2733 pCMV-N-HA-seq.txt
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产品名称

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D2733

pCMV-N-HA

1μg

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保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间
   的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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2. Xing J, Ni L, Wang S, Wang K, Lin R, Zheng C.
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   Med Microbiol Immunol. 2013 May 1.
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   Virus Genes. 2014 Apr;48(2):243-51. doi: 10.1007/s11262-013-1006-z. Epub 2014 Jan 8.



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