pCMV-N-His

 产品编号: D2737
 产品包装: 1μg
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产品简介

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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2737 pCMV-N-His 1μg 862.00元

    pCMV-N-His是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
    pCMV-N-His质粒的主要信息如下:
    Feature Nucleotide                                        Position
    CMV promoter                                              1-602
    T3 promoter and T3 primer binding site                    620-639
    His tag                                                   679-696
    multiple cloning site                                     699-772
    T7 promoter and T7 primer binding site                    815-836
    SV40 polyA signal                                         847-1230
    f1 origin of ss-DNA replication                           1368-1674
    bla promoter                                              1699-1823
    SV40 promoter                                             1843-2181
    neomycin/kanamycin resistance ORF                         2216-3007
    HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal                    3008-3466
    pUC origin                                                3595-4262
    pCMV-N-His质粒的图谱如下:
     
    pCMV-N-His的多克隆位点的详细图谱如下:
                                           His tag         XmaI
        SacI                       M  H  H  H   H  H  H    SmaI
    651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGCA TCATCACCAT CACCATAGCC
        CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACGT AGTAGTGGTA GTGGTATCGG
                          PstI
             BamHI  HindIII      EcoRI EcoRV  SalI   BglII XhoI
    701 CGGGCGGATC CAAGCTTCTG CAGGAATTCG ATATCGTCGA CAGATCTCTC
        GCCCGCCTAG GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC TATAGCAGCT GTCTAGAGAG
           XbaI         ApaI   KpnI               KpnI
    751 GAGTCTAGAA CTAGTGGGCC CGGTACCTTA ATTAATTAAG GTACCAGGTA
        CTCAGATCTT GATCACCCGG GCCATGGAAT TAATTAATTC CATGGTCCAT
    pCMV-N-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-His)包括:
    Afl II    Age I    Ahd I       Asc I     Bbs I    Bbv II      Blp I
    Bsg I     BsiW I   BsmB I      BspM II   BsrG I   BssH II     Bst1107 I
    BstE II   Ear I    Eco47 III   Eco72 I   EcoN I   Esp I       Fse I
    Nru I     PflM I   Pme I       Pml I     PpuM I   Psp1406 I   Sap I
    Sca I     Spl I
    pCMV-N-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-His once)包括:

Nde I      CA`TA,TG       241
SnaB I     TAC|GTA        347
Nhe I      G`CTAG,C       598
Sac I      G,AGCT`C       656
Sac II     CC,GC`GG       663
BstX I     CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I      GC`GGCC,GC     669
PspA I     C`CCGG,G       700
Xma I      C`CCGG,G       700
Srf I      GCCC|GGGC      702
Sma I      CCC|GGG        702
BamH I     G`GATC,C       707
Hind III   A`AGCT,T       713
Pst I      C,TGCA`G       723
EcoR I     G`AATT,C       725
EcoR V     GAT|ATC        733
Sal I      G`TCGA,C       737
Acc I      GT`MK,AC       738
Bgl II     A`GATC,T       743
PaeR7 I    C`TCGA,G       749
Xho I      C`TCGA,G       749
Xba I      T`CTAG,A       755
Spe I      A`CTAG,T       761
Bsp120 I   G`GGCC,C       767
Apa I      G,GGCC`C       771

Pvu I       CG,AT`CG          849
Bcl I       T`GATC,A          1003
Mun I       C`AATT,G          1096
Hpa I       GTT|AAC           1109
Mlu I       A`CGCG,T          1232
Dra III     CAC,NNN`GTG       1462
Sfi I       GGCCN,NNN`NGGCC   2121
BseR I      GAGGAG 16/14      2164
Stu I       AGG|CCT           2167
Cla I       AT`CG,AT          2186
Kas I       G`GCGC,C          2345
Nar I       GG`CG,CC          2346
Ehe I       GGC|GCC           2347
Bbe I       G,GCGC`C          2349
Msc I       TGG|CCA           2428
Tth111 I    GACN`N,NGTC       2464
BsrD I      GCAATG, 8         2579
Bsp1286 I   G,DGCH`C          2649
Rsr II      CG`GWC,CG         2862
BsiC I      TT`CG,AA          3028
BstB I      TT`CG,AA          3028
Bsa I       GGTCTC 7/11       3335
HgiE II     ACCNNNNNNGGT-1/13 3675
ApaL I      G`TGCA,C          3950

    pCMV-N-His质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列
如下:
    T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
    T7 primer(815-836): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
    pCMV-N-His的全序列信息: D2737 pCMV-N-His-seq.txt
包装清单:

产品编号

产品名称

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D2737

pCMV-N-His

1μg

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保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间
   的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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1. Shi Y, Lv G, Chu Z, Piao L, Liu X, Wang T, Jiang Y, Zhang P.
   Identification of natural splice variants of SAMHD1 in virus-infected HCC.
   Oncol Rep. 2014 Feb;31(2):687-92. doi: 10.3892/or.2013.2895. Epub 2013 Dec 5.




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