在日常生活中,大家总是谈癌色变,现代生命科学研究中,肿瘤相关研究占据了不可或缺的一部分,肿瘤治疗问题也是现在医学中函待解决的棘手问题之一。
在进行肿瘤相关研究时,我们不得不提到的MMP家族。其中基质金属蛋白酶3 (MMP-3,也称MMP3)是MMP家族的重要成员之一。能破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障、释放E-钙粘蛋白(E-cadherin)、促进肿瘤侵袭转移、促进炎症反应,在肿瘤等的研究中日益受到重视。此外,MMP-3还参与组织形态发生、损伤修复、炎症反应等一系列生理、病理过程,在风湿性关节炎、动脉粥样硬化等疾病发生发展过程中发挥重要作用。
碧云天研发的基质金属蛋白酶3 (MMP-3)活性荧光检测试剂盒和基质金属蛋白酶3 (MMP-3)抑制剂筛选试剂盒均采用荧光共振能量转移(FRET)的方法,可简单、快速、高通量、高灵敏的对基质金属蛋白酶3 (MMP-3)进行活性荧光检测或抑制剂筛选实验。
检测原理
MCA是荧光供体,Dnp是荧光受体或称为淬灭基团,供体的发射光谱和受体的激发光谱有一定的重叠,当这两个荧光基团间的距离合适时(一般7-10nm),荧光能量由供体向受体转移,导致供体荧光分子的荧光强度衰减。MCA和Dnp被连接到MMP-3酶的天然底物上的两端,当MMP-3蛋白酶没有切割该底物时,两个基团足够接近,发生荧光共振能量转移,即Dnp可淬灭MCA的荧光而导致检测不到荧光;当该底物被MMP-3蛋白酶切割后,多肽的首尾两端分离,两个基团分开,MCA的荧光不再被Dnp淬灭,即可检测到MCA的荧光,这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测MMP-3蛋白酶的酶活性。
如果在反应体系中加入MMP-3蛋白酶的抑制剂(Inhibitor),荧光的生成会被抑制,荧光强度与抑制剂的抑制效果成反比,这样就可以检测出MMP-3蛋白酶抑制剂的抑制效果。
图1基质金属蛋白酶3(MMP-3)活性荧光检测/抑制剂筛选试剂盒检测MMP-3活性的原理图。
接下来让我们带小伙伴们来详细了解一下这两款产品的特点吧!
基质金属蛋白酶3(MMP-3)活性荧光检测试剂盒
产品特点
检测灵敏度高,线性范围宽,样品用量少 96孔板中,本试剂盒最少可以检测到20µU的MMP-3活性,通常1-10μl细胞或组织样品足够用于本试剂盒的荧光法检测。
特异性强 本试剂盒使用的底物为NFF-3的相应肽段序列,可以特异性地用于MMP-3活性的检测而区分于其它基质金属蛋白酶。
适用范围广,使用灵活 本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆以及肝脏等组织或细胞样品的检测,不仅适合少量样本的检测,也非常适合高通量筛选的自动化操作系统,灵活性强。
检测速度快 本试剂盒使用胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)对MMP-3前体进行激活,激活时间仅需要5分钟。而其它试剂盒使用APMA激活方式的一般需要约24小时的激活时间。
通用性好 常规的蛋白裂解液处理的样品也可以用本试剂盒的检测,并且提供了纯化的MMP-3酶作为阳性对照,便于检测体系的建立和确认。
可进行MMP-3的绝对活性检测。本试剂盒提供MCA标准溶液,可以通过设置标准曲线,计算出样品中的MMP-3绝对活性。
检测效果
图2. 基质金属蛋白酶3 (MMP-3)活性荧光检测试剂盒的MCA标准曲线和对MCA阳性对照及组织、细胞样品的检测效果。A. 本试剂盒的MCA标准曲线示意图。B. 本试剂盒对MMP-3 Positive Control (1X)的检测效果。C. 本试剂盒对小鼠不同组织及293T细胞中的总MMP-3酶活性检测效果。其中小鼠脾、肺、肾脏及小肠组织总蛋白量都为20μg,293T细胞的总蛋白量为40μg。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
基质金属蛋白酶3(MMP-3)抑制剂筛选试剂盒
产品特点
筛选结果真实可信 本试剂盒中使用的全长重组人MMP-3蛋白已预先激活,酶活性好。同时使用的底物为NFF-3的相应肽段序列,可以特异性地用于MMP-3活性的检测而区分于其它基质金属蛋白酶。因此筛选获得的抑制剂更加真实可信。
稳定性好,检测效果佳 孵育1小时,100%酶活性信号约为背景信号的5-7倍,确保有足够的信号范围用于抑制剂的筛选。通常在孵育1小时内,信号与孵育时间成正比,1小时后即趋于稳定。
线性范围宽 本试剂盒中提供了MMP-3酶(MMP-3 Enzyme)、底物(Substrate)、阳性对照抑制剂(GM6001),并且对MMP-3酶和底物的使用量进行了优化,不仅能检测出IC50很低的抑制剂,也能检测出IC50较高的抑制剂。
筛选效果
图3. 基质金属蛋白酶3(MMP-3)抑制剂筛选试剂盒检测GM6001的效果图。实际检测结果可能会因样品和检测条件等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
产品信息
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
P0338S | 基质金属蛋白酶3 (MMP-3)活性荧光检测试剂盒 | 100次 | |
P0338M | 基质金属蛋白酶3 (MMP-3)活性荧光检测试剂盒 | 500次 | |
P0339S | 基质金属蛋白酶3 (MMP-3)抑制剂筛选试剂盒 | 100次 | |
P0339M | 基质金属蛋白酶3 (MMP-3)抑制剂筛选试剂盒 | 500次 |